应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
51/1返回列表
查看: 5251  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)

[求助] 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

最近我一直在跑蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，已经试过很多次，还是跑不好。
    我的蛋白是pI为6.3~7.6的稻米蛋白，14kD~16kD，不止一种蛋白。参考王家政的蛋白技术手册，用的是10%的分离胶和5%的浓缩胶，电泳缓冲液的pH是8.8，冰浴电泳，但是跑出来的效果非常不好，条带如下，连浓缩胶里面都有条带，但是跑SDS-PAGE的时候是好的啊！！图片也贴在下面。

目标蛋白 SDS-PAGE.png



目标蛋白 Native-PAGE.png 脱色比较完全后在浓缩胶内能看到拖尾的条带。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

电泳、bio-rad 电转化仪及操作

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-09 13:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 14:53:18
非变性电泳条件下，蛋白依靠的是本身的负电荷移动，比起普通的SDS-PAGE，跑起来要慢得多。而且如果样品浓度过高会引起聚合沉淀。从你的胶看来可能就是这种情况。你可以用一些较弱的非离子去垢剂（例如Triton X-100） ...

我有几点想说明一下。
1. 增溶的目的是什么呢？？稀释样品？？我的样品溶解性还是非常好的。
2. 我的目的是分开不同的蛋白，在SDS-PAGE中，由于分子量大小相近，分不开了。
3. 浓缩胶里也有条带是为什么呢？？
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-09 15:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiniyuanai: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢，真是好人 2012-10-09 15:19:07
非变性电泳条件下，蛋白依靠的是本身的负电荷移动，比起普通的SDS-PAGE，跑起来要慢得多。而且如果样品浓度过高会引起聚合沉淀。从你的胶看来可能就是这种情况。你可以用一些较弱的非离子去垢剂（例如Triton X-100）增溶一下样品。不知道你跑非变性胶的目的，是做in gel活性染色还是只想要分开不同的蛋白呢？
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zh910917
3楼2012-10-09 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shiniyuanai at 2012-10-09 15:25:05
我有几点想说明一下。
1. 增溶的目的是什么呢？？稀释样品？？我的样品溶解性还是非常好的。
2. 我的目的是分开不同的蛋白，在SDS-PAGE中，由于分子量大小相近，分不开了。
3. 浓缩胶里也有条带是为什么呢？？...

增溶的目的是利用detergent包被在蛋白分子的表面，使他们不发生聚合沉淀。你的浓缩胶里面的条带大概是聚合沉淀的蛋白。由于发生聚合，分子量变大，无法进入分离胶。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-09 15:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 15:35:12
增溶的目的是利用detergent包被在蛋白分子的表面，使他们不发生聚合沉淀。你的浓缩胶里面的条带大概是聚合沉淀的蛋白。由于发生聚合，分子量变大，无法进入分离胶。...


终于找到一个出口。
但是我没用过detergent，Triton X-100能用于我的实验吗？？我查了一下，是否0.1%的Triton X-100这样的浓度比较适合溶解我的样品？？
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-10-09 15:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭