应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
51/1返回列表
查看: 6039  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)

[求助] 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

最近我一直在跑蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，已经试过很多次，还是跑不好。
    我的蛋白是pI为6.3~7.6的稻米蛋白，14kD~16kD，不止一种蛋白。参考王家政的蛋白技术手册，用的是10%的分离胶和5%的浓缩胶，电泳缓冲液的pH是8.8，冰浴电泳，但是跑出来的效果非常不好，条带如下，连浓缩胶里面都有条带，但是跑SDS-PAGE的时候是好的啊！！图片也贴在下面。

目标蛋白 SDS-PAGE.png



目标蛋白 Native-PAGE.png 脱色比较完全后在浓缩胶内能看到拖尾的条带。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

电泳、bio-rad 电转化仪及操作

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-09 13:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shiniyuanai at 2012-10-09 15:25:05
我有几点想说明一下。
1. 增溶的目的是什么呢？？稀释样品？？我的样品溶解性还是非常好的。
2. 我的目的是分开不同的蛋白，在SDS-PAGE中，由于分子量大小相近，分不开了。
3. 浓缩胶里也有条带是为什么呢？？...

增溶的目的是利用detergent包被在蛋白分子的表面，使他们不发生聚合沉淀。你的浓缩胶里面的条带大概是聚合沉淀的蛋白。由于发生聚合，分子量变大，无法进入分离胶。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-09 15:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiniyuanai: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢，真是好人 2012-10-09 15:19:07
非变性电泳条件下，蛋白依靠的是本身的负电荷移动，比起普通的SDS-PAGE，跑起来要慢得多。而且如果样品浓度过高会引起聚合沉淀。从你的胶看来可能就是这种情况。你可以用一些较弱的非离子去垢剂（例如Triton X-100）增溶一下样品。不知道你跑非变性胶的目的，是做in gel活性染色还是只想要分开不同的蛋白呢？
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zh910917
3楼2012-10-09 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 14:53:18
非变性电泳条件下，蛋白依靠的是本身的负电荷移动，比起普通的SDS-PAGE，跑起来要慢得多。而且如果样品浓度过高会引起聚合沉淀。从你的胶看来可能就是这种情况。你可以用一些较弱的非离子去垢剂（例如Triton X-100） ...

我有几点想说明一下。
1. 增溶的目的是什么呢？？稀释样品？？我的样品溶解性还是非常好的。
2. 我的目的是分开不同的蛋白，在SDS-PAGE中，由于分子量大小相近，分不开了。
3. 浓缩胶里也有条带是为什么呢？？
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-09 15:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 15:35:12
增溶的目的是利用detergent包被在蛋白分子的表面，使他们不发生聚合沉淀。你的浓缩胶里面的条带大概是聚合沉淀的蛋白。由于发生聚合，分子量变大，无法进入分离胶。...


终于找到一个出口。
但是我没用过detergent，Triton X-100能用于我的实验吗？？我查了一下，是否0.1%的Triton X-100这样的浓度比较适合溶解我的样品？？
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-10-09 15:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 19:22 by lXgU0RvNTDC9
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 7/350 2026-08-23 19:10 by lXgU0RvNTDC9
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 18:55 by lXgU0RvNTDC9
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 3/150 2026-08-23 16:30 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 15:33 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:21 by KM5EcsNQRBPn
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭