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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
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shiniyuanai

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-10 07:59:35
浓度要靠自己试，因为不同的样品所需的浓度不一样，可以从0.1-2%做个梯度。...

恩，谢谢。赶紧去试试
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11楼2012-10-10 09:15:53
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chanbetter

新虫 (初入文坛)
麻烦问一下楼主，这个问题现在解决了么？最近我做Native-PAGE遇到了与楼主相似的情况，求经验~~~
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12楼2012-10-27 15:33:49
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
在样品中加入SDS，使得终浓度为0.0003%，37度保温一会再上样试试。此外，浓缩胶有东西，是因为蛋白是多聚体吧，很大很大，下不去，可以把浓缩胶调成3.9%试试。
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13楼2013-02-28 12:03:29
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一切只是尘埃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-02-28 12:03:29
在样品中加入SDS，使得终浓度为0.0003%，37度保温一会再上样试试。此外，浓缩胶有东西，是因为蛋白是多聚体吧，很大很大，下不去，可以把浓缩胶调成3.9%试试。

非变性胶不是应该不能含有sds的吗？！加上sds以后样品还是按原来的性质跑吗？您有做过碱性蛋白的native-page吗？跑完胶没有条带会是什么原因呢？！
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14楼2013-06-06 13:16:23
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aodiguan

新虫 (初入文坛)
请问您的native-PAGE电泳跑好了吗？我一直做，为什么跑一段时间就会出现条带中空的现象，而且条带也非常不清晰，求指导
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15楼2013-12-19 09:04:41
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baoshiling

银虫 (小有名气)
有时蛋白本身的性质决定了在native胶中有多种形式看起来会smear，但当找到了其配体或者互作的蛋白等一起电泳时就会出现非常漂亮的一条带。
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相信自己，怒放生命
16楼2014-10-09 08:21:28
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zh910917

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 14:53:18
非变性电泳条件下，蛋白依靠的是本身的负电荷移动，比起普通的SDS-PAGE，跑起来要慢得多。而且如果样品浓度过高会引起聚合沉淀。从你的胶看来可能就是这种情况。你可以用一些较弱的非离子去垢剂（例如Triton X-100） ...

你好，我刚刚看了你的这个回帖，我也有同样的问题，想问下你，那个非变性电泳中可以加去垢剂吗？会不会对蛋白质引起变性？

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17楼2018-12-29 10:12:03
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