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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么maker跑不开？
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Restarter

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么maker跑不开？ 已有10人参与

maker为什么跑不开啊，我点的是50bp的maker，可以分开9条带，分别是500、400、350、300、250、200、150、100、50，而我要的是170的片段，我用的是那种小的电泳槽，估计10*20平方厘米大，电压用的110V，下面是我跑胶结果，请能人指导指导！

为什么maker跑不开？
2014.10.7.2.jpg
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1楼 2014-10-08 09:29:22
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Restarter

金虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-10-08 10:16:55
胶浓度提高到1.2%-2%，应该能够把小片段分开，但是胶浓度高，凝胶会很快，配胶的时候需要迅速

我的胶浓度是2%的，忘了说了。。
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8楼2014-10-08 16:40:54
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Restarter

金虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 圆yy at 2014-10-08 10:53:17
1、电压调到100v左右
2、胶浓度1.5%左右
3、电泳缓冲液新配
看看结果还会不会那个样子

你说的第二三点我之前都是这样做的，就是电压高低与maker能否跑开有没有很大关系啊？
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9楼2014-10-08 16:42:50
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Restarter

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 生物是个坑 at 2014-10-08 15:44:31
缓冲液换新的，胶浓度调至2.5%，一般来说凝胶浓度对应着线性双链DNA的分离范围。50bp-2000bp对应的胶浓度是2.0%。楼主50bp的ladder建议胶浓度在2.5%。再有就是电场强度，跑电泳是不能只看是多少电压，而是应该计算电 ...

谢谢，我马上试一下！
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10楼2014-10-08 16:44:24
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金虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by gejiaoyu at 2014-10-08 14:54:58
考虑缓冲液与制胶的缓冲液浓度是否一致

我用的都是一样的缓冲液啊！
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11楼2014-10-08 16:46:10
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Restarter

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 生物是个坑 at 2014-10-08 15:44:31
缓冲液换新的，胶浓度调至2.5%，一般来说凝胶浓度对应着线性双链DNA的分离范围。50bp-2000bp对应的胶浓度是2.0%。楼主50bp的ladder建议胶浓度在2.5%。再有就是电场强度，跑电泳是不能只看是多少电压，而是应该计算电 ...

谢谢啊 ！
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12楼2014-10-08 16:49:32
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金虫 (小有名气)
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13楼: Originally posted by cya_yanan at 2014-10-08 17:18:59
图中的maker，条带都推挤在一起了，显然没跑开，所以看上去区分不明显.110v 时间多长啊？可能时间短了 提高电压或时间，我一般120v 25min 左右

跑倒是跑了半个多小时呢，再跑就都跑出去了，是不是电压还要降低，这样就多跑一些时间！
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14楼2014-10-08 21:40:07
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Restarter

金虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by 单体化合物 at 2014-10-08 22:35:02
maker当然跑不开了，能跑开的是marker

呃呃，写错了，受教受教，呵呵

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17楼2014-10-08 22:59:12
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Restarter

金虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by 青师大涛声 at 2014-10-08 23:06:46
你要的目的片段比较小，所以大的胶浓度条带不能跑开，建议胶的浓度低一些。另外也不排除Marker和DNA的质量可能引起了问题，你的Marker和DNA冷存上是否上有疏忽啊？

片段小要分开的话不正要用浓度大点的胶吗，在低浓度的胶上大小差距不多的片段跑的差不多快，这样分不开了啊，不过这属于我自己的理解maker和DNA应该都是没有问题的，谢谢啦！
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20楼2014-10-09 21:38:26
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Restarter

金虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by 星小源 at 2014-10-09 10:09:45
是不是胶没有凝好啊？

胶还可以啊，自我感觉，谢谢！
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21楼2014-10-09 21:39:12
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