[求助] 【求助】SDS-PAGE条带跑不出来

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1楼2013-09-22 22:11:40

ufowjing

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这是第二张图

IMG_2101.JPG

2楼2013-09-22 22:15:01

cicelyzh

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第一张图的marker跑得也不好，可能是胶没做好或者电泳的问题。第二张图marker条带分得还行，说明是样品的问题。用缓冲液匀浆条带少是因为破碎不完全或者样品蛋白浓度过低。用裂解液匀浆也是可以的，不过先要弄清楚所用裂解液的成分。如果裂解液里含有浓度过高的盐分，对SDS-PAGE的影响会很大。

3楼2013-09-23 00:47:53

wangpeng227

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样品裂解的不好，SDS-PAGE loading buffer的量不够，条带会很难看

蛋白上的太多，条带也会很难看的，不要贪多

4楼2013-09-23 01:17:03

霹雳光

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我觉得蛋白提取的质量不是特别好

事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人

5楼2013-09-23 08:54:04

ritchiejin

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你的上样量是多少啊，看你的marker分得还不错啊。样品这样感觉是杂质太多了。

6楼2013-09-23 09:29:00

makubex83

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应该是蛋白质浓度太高了，一般都在千分之三左右。你试着把蛋白浓度依次调低看看。

7楼2013-09-23 13:37:17

张力民1598

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你可以裂解后测一下蛋白浓度。电泳时上样量做个梯度试一下。

8楼2013-09-23 14:07:17

ufowjing

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引用回帖:

3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-23 00:47:53
第一张图的marker跑得也不好，可能是胶没做好或者电泳的问题。第二张图marker条带分得还行，说明是样品的问题。用缓冲液匀浆条带少是因为破碎不完全或者样品蛋白浓度过低。用裂解液匀浆也是可以的，不过先要弄清楚所 ...

谢谢您的回答，裂解液是用的索莱宝的高效RIPA裂解液，盐分浓度过高对跑出来的条带具体会有什么影响？？

9楼2013-09-24 15:55:15

ufowjing

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 霹雳光 at 2013-09-23 08:54:04
我觉得蛋白提取的质量不是特别好

谢谢你的回答，那可以怎样改进呢？现在是用的RIPA高效裂解液冰水浴手工匀浆裂解30min

10楼2013-09-24 15:59:39