24小时热门版块排行榜    

查看: 2349  |  回复: 15

ufowjing

银虫 (小有名气)

[求助] 【求助】SDS-PAGE条带跑不出来

做的10%斑马鱼肝脏匀浆,手工匀浆。匀浆后12000g离心10min,煮沸上样前12000g离心10min。
之前求助过条带很少,有同学建议用裂解液做介质匀浆。
买了索莱宝的高效RIPA裂解液,再跑出来的条带依然很少,并且染色后条带上方有竖条出现。
第一个图图上marker左边的两条是用裂解液的匀浆,再左边的两条是用PBS做的匀浆。想求助一下各位研友,条带跑不出来是样品的提取有问题吗?之前实验室的师兄用PB提取的匀浆跑出来的条带很清晰很多。
还有裂解液跑出来的条带上方为什么会有竖条出现?

第二张图的条带全是用裂解液匀浆的,条带两侧全是竖条的原因是什么?
谢谢各位研友的指导。
【求助】SDS-PAGE条带跑不出来
IMG_2105.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufowjing

银虫 (小有名气)

这是第二张图
【求助】SDS-PAGE条带跑不出来-1
IMG_2101.JPG

2楼2013-09-22 22:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-23 08:51:22
第一张图的marker跑得也不好,可能是胶没做好或者电泳的问题。第二张图marker条带分得还行,说明是样品的问题。用缓冲液匀浆条带少是因为破碎不完全或者样品蛋白浓度过低。用裂解液匀浆也是可以的,不过先要弄清楚所用裂解液的成分。如果裂解液里含有浓度过高的盐分,对SDS-PAGE的影响会很大。
3楼2013-09-23 00:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-23 08:51:38
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:06:44
样品裂解的不好,SDS-PAGE loading buffer的量不够,条带会很难看

蛋白上的太多,条带也会很难看的,不要贪多
4楼2013-09-23 01:17:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:06:51
我觉得蛋白提取的质量不是特别好
事实证明,除了你自己,不要指望任何一个人
5楼2013-09-23 08:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ritchiejin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:06:57
你的上样量是多少啊,看你的marker分得还不错啊。样品这样感觉是杂质太多了。
6楼2013-09-23 09:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

makubex83

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:07:02
应该是蛋白质浓度太高了,一般都在千分之三左右。你试着把蛋白浓度依次调低看看。
7楼2013-09-23 13:37:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:07:10
你可以裂解后测一下蛋白浓度。电泳时上样量做个梯度试一下。
8楼2013-09-23 14:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufowjing

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-23 00:47:53
第一张图的marker跑得也不好,可能是胶没做好或者电泳的问题。第二张图marker条带分得还行,说明是样品的问题。用缓冲液匀浆条带少是因为破碎不完全或者样品蛋白浓度过低。用裂解液匀浆也是可以的,不过先要弄清楚所 ...

谢谢您的回答,裂解液是用的索莱宝的高效RIPA裂解液,盐分浓度过高对跑出来的条带具体会有什么影响??
9楼2013-09-24 15:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufowjing

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 霹雳光 at 2013-09-23 08:54:04
我觉得蛋白提取的质量不是特别好

谢谢你的回答,那可以怎样改进呢? 现在是用的RIPA高效裂解液冰水浴手工匀浆裂解30min
10楼2013-09-24 15:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ufowjing 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +5 SCSIOyxguo 2026-09-03 8/400 2026-09-06 15:06 by 可爱小花朵
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中,邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
请填处理意见