应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】SDS-PAGE条带跑不出来
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
161/2返回列表12下一页
查看: 1995  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ufowjing

银虫 (小有名气)

[求助] 【求助】SDS-PAGE条带跑不出来

做的10%斑马鱼肝脏匀浆，手工匀浆。匀浆后12000g离心10min，煮沸上样前12000g离心10min。
之前求助过条带很少，有同学建议用裂解液做介质匀浆。
买了索莱宝的高效RIPA裂解液，再跑出来的条带依然很少，并且染色后条带上方有竖条出现。
第一个图图上marker左边的两条是用裂解液的匀浆，再左边的两条是用PBS做的匀浆。想求助一下各位研友，条带跑不出来是样品的提取有问题吗？之前实验室的师兄用PB提取的匀浆跑出来的条带很清晰很多。
还有裂解液跑出来的条带上方为什么会有竖条出现？

第二张图的条带全是用裂解液匀浆的，条带两侧全是竖条的原因是什么？
谢谢各位研友的指导。
【求助】SDS-PAGE条带跑不出来
IMG_2105.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-22 22:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufowjing

银虫 (小有名气)
这是第二张图
【求助】SDS-PAGE条带跑不出来-1
IMG_2101.JPG
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-22 22:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-23 08:51:22
第一张图的marker跑得也不好，可能是胶没做好或者电泳的问题。第二张图marker条带分得还行，说明是样品的问题。用缓冲液匀浆条带少是因为破碎不完全或者样品蛋白浓度过低。用裂解液匀浆也是可以的，不过先要弄清楚所用裂解液的成分。如果裂解液里含有浓度过高的盐分，对SDS-PAGE的影响会很大。
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-23 00:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-23 08:51:38
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:06:44
样品裂解的不好，SDS-PAGE loading buffer的量不够，条带会很难看

蛋白上的太多，条带也会很难看的，不要贪多
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-23 01:17:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:06:51
我觉得蛋白提取的质量不是特别好
赞一下 回复此楼
事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
5楼2013-09-23 08:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ritchiejin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:06:57
你的上样量是多少啊，看你的marker分得还不错啊。样品这样感觉是杂质太多了。
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-23 09:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

makubex83

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:07:02
应该是蛋白质浓度太高了，一般都在千分之三左右。你试着把蛋白浓度依次调低看看。
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-23 13:37:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ufowjing: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 16:07:10
你可以裂解后测一下蛋白浓度。电泳时上样量做个梯度试一下。
赞一下 回复此楼
8楼2013-09-23 14:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufowjing

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-23 00:47:53
第一张图的marker跑得也不好，可能是胶没做好或者电泳的问题。第二张图marker条带分得还行，说明是样品的问题。用缓冲液匀浆条带少是因为破碎不完全或者样品蛋白浓度过低。用裂解液匀浆也是可以的，不过先要弄清楚所 ...

谢谢您的回答，裂解液是用的索莱宝的高效RIPA裂解液，盐分浓度过高对跑出来的条带具体会有什么影响？？
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-24 15:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufowjing

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 霹雳光 at 2013-09-23 08:54:04
我觉得蛋白提取的质量不是特别好

谢谢你的回答，那可以怎样改进呢？ 现在是用的RIPA高效裂解液冰水浴手工匀浆裂解30min
赞一下 回复此楼
10楼2013-09-24 15:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ufowjing 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 343求调剂085601 +3 要努力学习x 2026-03-29 3/150 2026-03-29 18:35 by wxiongid
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +7 cccchenso 2026-03-29 7/350 2026-03-29 15:00 by 唐沐儿
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 6/300 2026-03-29 14:16 by Qshers
[考研] 332求调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +14 zhubinhao 2026-03-27 14/700 2026-03-29 10:01 by Sjndkwm
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +6 kotoko_ik 2026-03-23 7/350 2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭