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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】SDS-PAGE条带跑不出来
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ufowjing

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ritchiejin at 2013-09-23 09:29:00
你的上样量是多少啊，看你的marker分得还不错啊。样品这样感觉是杂质太多了。

谢谢您的回答。匀浆大概是10%左右，杂质太多还能靠什么方法处理呢？已经12000转10min离心了两次
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11楼2013-09-24 16:02:28
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ufowjing

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by makubex83 at 2013-09-23 13:37:17
应该是蛋白质浓度太高了，一般都在千分之三左右。你试着把蛋白浓度依次调低看看。

谢谢您的回答。可是条带很少呀，只有三四条，是不是蛋白浓度太低了。
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12楼2013-09-24 16:03:36
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ufowjing

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张力民1598 at 2013-09-23 14:07:17
你可以裂解后测一下蛋白浓度。电泳时上样量做个梯度试一下。

谢谢您的回答，条带少是蛋白浓度太低吗？
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13楼2013-09-24 16:06:12
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by ufowjing at 2013-09-24 16:06:12
谢谢您的回答，条带少是蛋白浓度太低吗？...

要么浓度低，要么细菌没裂开。

[ 发自小木虫客户端 ]
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14楼2013-09-24 16:32:31
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makubex83

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ufowjing: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢回答。但是之前我师兄跑出来的条带很多，我们都是做的斑马鱼肝脏匀浆，只是匀浆介质他用的PB我用的PBS，匀浆步骤都是一样的，我的 条带少还是样品的提取有问题吗？ 2013-09-26 17:39:13
引用回帖:
12楼: Originally posted by ufowjing at 2013-09-24 16:03:36
谢谢您的回答。可是条带很少呀，只有三四条，是不是蛋白浓度太低了。...

一般只有在蛋白质浓度过高的时候才会出现拖尾的情况，你那拖尾很明显，我觉得是蛋白浓度高了，你可以稀释一下，在跑跑看看，几个泳道依次稀释一下，找一个比较合理的浓度，以后就按照这个浓度跑就可以。条带少是说明你只有这几种蛋白，和浓度没关系。你浓度多还是少，该是几条蛋白条带还是几条条带，条带数量是不会变的。
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15楼2013-09-24 17:47:31
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makubex83

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ufowjing: 金币+5 2013-09-27 08:49:35
引用回帖:
15楼: Originally posted by makubex83 at 2013-09-24 17:47:31
一般只有在蛋白质浓度过高的时候才会出现拖尾的情况，你那拖尾很明显，我觉得是蛋白浓度高了，你可以稀释一下，在跑跑看看，几个泳道依次稀释一下，找一个比较合理的浓度，以后就按照这个浓度跑就可以。条带少是说 ...

你们提取的东西是一样的，步骤是一样的，那就只能在试剂上找原因了，你可以用同样的样品，分别用你和你师兄两个方法一起提提，对比一下，要是还是一个多，一个少，那就是试剂的问题，要是条带差不多一样多，那就是试剂问题不大。
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16楼2013-09-26 19:23:02
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