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[求助]
【求助】SDS-PAGE条带跑不出来
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做的10%斑马鱼肝脏匀浆，手工匀浆。匀浆后12000g离心10min，煮沸上样前12000g离心10min。 之前求助过条带很少，有同学建议用裂解液做介质匀浆。 买了索莱宝的高效RIPA裂解液，再跑出来的条带依然很少，并且染色后条带上方有竖条出现。 第一个图图上marker左边的两条是用裂解液的匀浆，再左边的两条是用PBS做的匀浆。想求助一下各位研友，条带跑不出来是样品的提取有问题吗？之前实验室的师兄用PB提取的匀浆跑出来的条带很清晰很多。 还有裂解液跑出来的条带上方为什么会有竖条出现？ 第二张图的条带全是用裂解液匀浆的，条带两侧全是竖条的原因是什么？ 谢谢各位研友的指导。  IMG_2105.JPG |
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makubex83
至尊木虫 (知名作家)
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【答案】应助回帖
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ufowjing: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢回答。但是之前我师兄跑出来的条带很多，我们都是做的斑马鱼肝脏匀浆，只是匀浆介质他用的PB我用的PBS，匀浆步骤都是一样的，我的 条带少还是样品的提取有问题吗？ 2013-09-26 17:39:13
ufowjing: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢回答。但是之前我师兄跑出来的条带很多，我们都是做的斑马鱼肝脏匀浆，只是匀浆介质他用的PB我用的PBS，匀浆步骤都是一样的，我的 条带少还是样品的提取有问题吗？ 2013-09-26 17:39:13
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一般只有在蛋白质浓度过高的时候才会出现拖尾的情况，你那拖尾很明显，我觉得是蛋白浓度高了，你可以稀释一下，在跑跑看看，几个泳道依次稀释一下，找一个比较合理的浓度，以后就按照这个浓度跑就可以。条带少是说明你只有这几种蛋白，和浓度没关系。你浓度多还是少，该是几条蛋白条带还是几条条带，条带数量是不会变的。 |
15楼2013-09-24 17:47:31
2楼2013-09-22 22:15:01
cicelyzh
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3楼2013-09-23 00:47:53
wangpeng227
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4楼2013-09-23 01:17:03