应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DGGE条带分不开
201/1返回列表
查看: 2000  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

遇见林

铁虫 (初入文坛)

[交流] DGGE条带分不开

最近做DGGE老是出现如下状况请各位同行帮忙分析下：
实验条件：用的是Bio-Rad475型梯度混合装置。做的是污水生物处理过程污泥中 亚硝酸盐氧化菌（Nosz），引物F968，R1401，约430bp。
图一：胶浓度8%，变性剂浓度范围是30%-50%，电泳温度60°C。电压120V，电泳7小时。TEMED20微升，100微升10%的APS。
图二：胶浓度6%，变性剂浓度范围是35%-45%，电泳温度60°C。电压70V，电泳14小时。TEMED20微升，100微升10%的APS。
附图三是P出的结果，感觉不是PCR的问题。PCR是50微升体系，引物2微升，模板5微升，mastermix25微升，加水补齐。
请各位大侠找找问题出在哪儿？？？？谢谢啦。。。

图一



图二
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-08-26 10:20:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有9个 )

userhung

禁虫 (文学泰斗)
★ ★ ★
遇见林(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+2, 谢谢提供链接 2012-08-27 00:54:28
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1495840
http://bbs.bbioo.com/forum.php?mod=viewthread&tid=50983
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-26 11:02:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ygbxk

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
遇见林(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-08-27 00:54:49
很有可能是引物的问题，DGGE原则上只能区分500个bp以下的DNA片段，你的引物对的扩增范围有点大，快接近500bp了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-26 16:18:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ygbxk

铁杆木虫 (正式写手)
你可以做一个总细菌的引物看看，如果没问题就是引物的问题了，还有问题就是电泳的问题了。可能性挺多，如果你用的药品时间较长或者被冰冻过，可能也出现这种情况，其它原因就不好说了，可能你得慢慢摸索。另外反硝化的引物有好多，你可以再查查问问试试。
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-26 16:23:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遇见林

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ygbxk at 2012-08-26 16:23:17
你可以做一个总细菌的引物看看，如果没问题就是引物的问题了，还有问题就是电泳的问题了。可能性挺多，如果你用的药品时间较长或者被冰冻过，可能也出现这种情况，其它原因就不好说了，可能你得慢慢摸索。另外反硝化 ...

我们的药品都是放四度冰箱里的。。O(∩_∩)O谢谢。。
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-26 16:50:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遇见林

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ygbxk at 2012-08-26 16:18:09
很有可能是引物的问题，DGGE原则上只能区分500个bp以下的DNA片段，你的引物对的扩增范围有点大，快接近500bp了。

你的意思是范围有点儿大，算下来也就430bp( ⊙ o ⊙ )！。。
赞一下 回复此楼
10楼2012-08-27 08:43:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遇见林

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2012-08-26 11:02:30
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1495840
http://bbs.bbioo.com/forum.php?mod=viewthread&tid=50983

看过这些资料，谢谢。。
赞一下 回复此楼
11楼2012-08-27 08:44:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ygbxk

铁杆木虫 (正式写手)
★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-09-02 07:33:48
引用回帖:
10楼: Originally posted by 遇见林 at 2012-08-27 08:43:35
你的意思是范围有点儿大，算下来也就430bp( ⊙ o ⊙ )！。。...

你看到文献当中有用这个引物做DGGE的吗？有的话应该没问题，没有的话就不好说了。
赞一下 回复此楼
14楼2012-08-27 11:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遇见林

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by ygbxk at 2012-08-27 11:18:19
你看到文献当中有用这个引物做DGGE的吗？有的话应该没问题，没有的话就不好说了。...

对呀，博士师兄他们就是用的这个。。谢谢。
赞一下 回复此楼
15楼2012-08-27 13:52:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jozsh

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
遇见林(金币+1): 谢谢参与
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-09-01 21:03:45
1.引物问题
2.DGGE温度有问题，不到60度（仪器坏了）所以没法解链
赞一下 回复此楼
17楼2012-09-01 17:51:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

strive123123

禁虫 (文坛精英)
★
遇见林(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
16楼2012-08-27 15:58:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

石城之子

木虫 (正式写手)
★
遇见林(金币+1): 谢谢参与
楼主你好，你的问题解决了吗？因为我也遇到了同样的问题。好郁闷。。。。

Administrator 2012-10-27 09hr 20min.jpg
赞一下 回复此楼
18楼2012-10-27 17:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxp666

铜虫 (正式写手)
★
遇见林(金币+1): 谢谢参与
问题解决了吗？
回复此楼
19楼2013-03-21 23:41:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
neu2343楼
2012-08-26 11:19   回复  
遇见林(金币+1): 谢谢参与
ailingzhihun4楼
2012-08-26 11:41   回复  
遇见林(金币+1): 谢谢参与
basa198楼
2012-08-26 16:53   回复  
遇见林(金币+1): 谢谢参与
gyfwon9楼
2012-08-26 16:54   回复  
遇见林(金币+1): 谢谢参与
liufuliang12楼
2012-08-27 08:49   回复  
遇见林(金币+1): 谢谢参与
假大空13楼
2012-08-27 09:48   回复  
遇见林(金币+1): 谢谢参与
fyz723220楼
2013-03-22 07:08   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 遇见林 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭