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wwsw38

铁虫 (小有名气)

[求助] 请各位虫友帮我分析一下,为什么 我的DGGE没有条带呀!!!!!!!!! 已有1人参与

图1:肠道双歧杆菌的PCR产物,510BP


图2:DGGE图,45-55的梯度。条带这么少?。。。。。有的完全没有条带!


图3:调成40-70后,加3微升的量,仍然没有条带。还变成黑乎乎的一片了!




虫友位帮我分析下,这是个什么情况嘛?

图1
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为自己加油
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

补图

图2



图3

为自己加油
2楼2011-11-18 20:51:19
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

没人啊?
为自己加油
3楼2011-11-19 00:49:22
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

在线等呀
为自己加油
4楼2011-11-19 14:11:48
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在雨中

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

wwsw38(金币+3): 谢谢你的回答。图2我只加1微升的样,有的条带就很亮了。加3微就黑了,所以不敢多加啊 2011-11-19 16:18:07
1. PCR产物挺好的,目标条带亮,没有非特异性扩增。
2. LZ你讲,你的DGGE加样3微升?这么少。我们一般都是20-30ul的样子呀。
3.第一个DGGE图挺正常的,也许你的样品中的条带种类本来就少。呵呵。PCR产物扩增好最好马上或者间隔不要超过12h去DGGE,相信LZ不会有这个问题。
5楼2011-11-19 15:39:58
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-11-19 15:39:58:
1. PCR产物挺好的,目标条带亮,没有非特异性扩增。
2. LZ你讲,你的DGGE加样3微升?这么少。我们一般都是20-30ul的样子呀。
3.第一个DGGE图挺正常的,也许你的样品中的条带种类本来就少。呵呵。PCR产物扩增好最 ...

双歧杆菌的条带原本就有点少,但也不至于只有一两条呀呜呜。
何况有的完全就没有条带,但是PCR产物这么亮,为什么会没有条带呢?想不通
为自己加油
6楼2011-11-19 16:20:44
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pcl-bunny

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-24 10:36:23
不知道具体哪里出了问题,可能有以下几方面:
1,引物必须带GC夹子。
2,上样为20~40微。
3,可能变性梯度不适合。
4,做胶出了问题。
5,建议电泳条件:80V,12小时。
NOPAIN,NOGAIN!
7楼2011-11-20 14:25:25
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cgspider

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-24 10:36:42
上面的童鞋,我的DGGE结果都是没有明显的成形条带,整个泳道都很亮,就是么的条带,什么意思啊?

我上样量做了一个梯度从5微升---30微升,85V,16h 和 200V,4h 都是这个结果,whywhywhy,PCR结果都很好的 ,我还做了胶回收。。。
你的能力撑不起你的野心
8楼2011-11-24 10:35:08
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琪瑶儿

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5): 鼓励新虫,谢谢交流哦~ 2011-12-26 11:29:38
我觉得是胶的问题,建议楼主跑浓度范围大一些的,看一下,是否还是这样的。
然后根据图谱的结果,再选取合适的浓度梯度为实验梯度
海洋环境微生物《DGGE,海洋污染修复
9楼2011-11-24 10:59:10
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pcl-bunny

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很可能是梯度没灌好,导致无法形成条带。
NOPAIN,NOGAIN!
10楼2011-11-24 14:38:16
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