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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请各位虫友帮我分析一下，为什么 我的DGGE没有条带呀！！！！！！！！！
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

[求助] 请各位虫友帮我分析一下，为什么 我的DGGE没有条带呀！！！！！！！！！ 已有1人参与

图1：肠道双歧杆菌的PCR产物，510BP


图2：DGGE图，45－55的梯度。条带这么少？。。。。。有的完全没有条带！


图3：调成40－70后，加3微升的量，仍然没有条带。还变成黑乎乎的一片了！




虫友位帮我分析下，这是个什么情况嘛？

图1
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为自己加油
1楼 2011-11-18 20:47:50
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-11-19 15:39:58:
1. PCR产物挺好的，目标条带亮，没有非特异性扩增。
2. LZ你讲，你的DGGE加样3微升？这么少。我们一般都是20-30ul的样子呀。
3.第一个DGGE图挺正常的，也许你的样品中的条带种类本来就少。呵呵。PCR产物扩增好最 ...

双歧杆菌的条带原本就有点少，但也不至于只有一两条呀呜呜。
何况有的完全就没有条带，但是PCR产物这么亮，为什么会没有条带呢？想不通
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为自己加油
6楼2011-11-19 16:20:44
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
补图

图2



图3
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为自己加油
2楼2011-11-18 20:51:19
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

wwsw38(金币+3): 谢谢你的回答。图2我只加1微升的样，有的条带就很亮了。加3微就黑了，所以不敢多加啊 2011-11-19 16:18:07
1. PCR产物挺好的，目标条带亮，没有非特异性扩增。
2. LZ你讲，你的DGGE加样3微升？这么少。我们一般都是20-30ul的样子呀。
3.第一个DGGE图挺正常的，也许你的样品中的条带种类本来就少。呵呵。PCR产物扩增好最好马上或者间隔不要超过12h去DGGE，相信LZ不会有这个问题。
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5楼2011-11-19 15:39:58
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pcl-bunny

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-24 10:36:23
不知道具体哪里出了问题，可能有以下几方面：
1，引物必须带GC夹子。
2，上样为20~40微。
3，可能变性梯度不适合。
4，做胶出了问题。
5，建议电泳条件：80V，12小时。
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NOPAIN,NOGAIN!
7楼2011-11-20 14:25:25
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