应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DGGE中GC夹问题
101/1返回列表
查看: 2023  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

daringhong

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DGGE中GC夹问题

请教一下，DGGE前做PCR,要在一对的引物中的一个引物一端加上长达几十个GC的发夹结构，那对于PCR的反应体系，特别是这一对引物，具有很大差别的退火温度和长度等等，这些因素对PCR反应体系是否会造成很大的影响？
我现在是先设计了一对引物，在没加GC之前先扩增了一下目的片段，感觉效果不错，然后换夹GC夹的试,就没目的条带了,不知道什么原因啊...
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-23 11:06:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

葳蕤幽蓝

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone: 那就一起关注啊 2011-06-09 10:13:04
不知道楼主的问题解决了没呀？我也遇到同样的问题
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-06-09 10:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-06-12 08:58:02
一般来讲，GC夹子不影响引物的退火温度等，完全按照没有GC夹子的引物来做就好。
另外，我个人觉得，做DGGE一定要用好酶，不然扩增到GC夹子这一段GC含量很高的区域可能扩增无法继续，导致PCR挺好，但是电泳效果很差。
合成GC夹子引物也要到好的公司合成，一般公司合成这种引物的质量不能保证。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-06-09 10:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke0812

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-12 08:58:27
我做过,退火温度计算时完全忽略GC夹子就行了,我的是52度
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-09 11:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

葳蕤幽蓝

铜虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 最好另外发帖，这样关注度更高 2011-06-12 08:58:48
请教大家，我用不带夹的引物扩增，条带很好，一换带夹的就不行了，然后我用不带夹扩增出的pcr产物纯化后再用带夹的扩，结果出现了2条带，请问大家有没有遇到过这样的情况呀？实验很真实烦心呀～～
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-06-11 20:46:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木子勇夏

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
虽然看到帖子是很久以前发的了，但是我想借用楼主地盘问个问题，GC夹的位置（比如是在上游引物还是下游引物，是在3’端还是5’端）对后续反应有什么影响呢？
楼主祝你实验顺利啊。
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-22 15:33:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daringhong

金虫 (小有名气)
引用回帖:
1985649楼: Originally posted by 木子勇夏 at 2013-01-22 15:33:47
虽然看到帖子是很久以前发的了，但是我想借用楼主地盘问个问题，GC夹的位置（比如是在上游引物还是下游引物，是在3’端还是5’端）对后续反应有什么影响呢？
楼主祝你实验顺利啊。

看过很多文献里，基本都是加在上游引物的，而且确定是加在5’端。祝实验顺利啊！
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-23 02:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木子勇夏

新虫 (小有名气)
лл
回复此楼
8楼2013-01-23 16:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南拳奶爸

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怎么都没多少人回答啊
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-13 11:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panhong666

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到了同样的问题
赞一下 回复此楼
10楼2014-04-19 20:56:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 daringhong 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭