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dgge最后一次分离切胶后用不带GC夹子引物扩增不出目的条带
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又来请教大家了。如题还是PCR扩增不出,之前用于做DGGE的pcr用B968F-GC和B1401R效果很好,长度不到500bp,现在切完胶要测序了,用B968F扩不出来了,它与B968F-GC的序列是一样的啊,为什么出不来呢????? 我试了做引物浓度梯度,模板浓度梯度,退火温度梯度,降落PCR也试过了,都不行,不带GC夹的引物几乎都扩出来了!! 今天用DNA模板做不带GC夹子引物的扩增也出不来,我就搞不明白了,引物序列是一样的,怎么这就结合不上去了!! 大家快帮我分析分析吧~~~~或者给我推荐几篇文献也好!跪谢啊!!!! |
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taoqi1986918
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