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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » dgge最后一次分离切胶后用不带GC夹子引物扩增不出目的条带
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wubingqi

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小果冻524 at 2013-03-27 18:25:00
还没做过纯菌的呢...

嗯，怀疑这个不带GC夹子的引物有问题，建议用纯菌试试，或是干脆更换新的引物，别忘了阳性对照
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小果冻524
11楼2013-03-27 21:06:23
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉有核酸染料就不好扩增了，我是用的银染法。
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12楼2013-03-28 22:38:59
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小果冻524

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by wubingqi at 2013-03-27 21:06:23
嗯，怀疑这个不带GC夹子的引物有问题，建议用纯菌试试，或是干脆更换新的引物，别忘了阳性对照...

确实是引物的问题，谢谢啦，问题已经解决了
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13楼2013-03-31 21:10:44
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小果冻524

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-03-28 22:38:59
个人感觉有核酸染料就不好扩增了，我是用的银染法。

谢谢啦，是正反引物浓度不对称导致，还是谢谢啦！祝你实验顺利！
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14楼2013-03-31 21:12:48
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小果冻524

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by taoqi1986918 at 2013-03-27 16:20:21
试一试MIX吧，可能模板中含有酶抑制剂。

谢谢，问题已经解决，是引物的问题呢
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15楼2013-03-31 21:13:47
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DoRbIr

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 小果冻524 at 2013-03-31 21:12:48
谢谢啦，是正反引物浓度不对称导致，还是谢谢啦！祝你实验顺利！...

这样啊，那我以后用到的时候，也应该注意一下了
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16楼2013-04-01 20:42:03
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快乐酒僧

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小果冻524 at 2013-03-27 10:51:23
gelred染色半小时，切胶后加双蒸水50ul微震荡十来分钟，放冰箱。。
问题是提取的DNA模板也不能用不带GC的引物扩增，只要换引物就残疾...

找到问题了吗？
建议：连扩两次；或者引物也可能有问题；再者有无GC，P的条件也是要适当变化的，有调整吗？
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17楼2013-05-07 20:04:47
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快乐酒僧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 快乐酒僧 at 2013-05-07 20:04:47
找到问题了吗？
建议：连扩两次；或者引物也可能有问题；再者有无GC，P的条件也是要适当变化的，有调整吗？...

不好意思，看到已经解决了。
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小果冻524
18楼2013-05-07 20:08:05
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小果冻524

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by 快乐酒僧 at 2013-05-07 20:08:05
不好意思，看到已经解决了。...

还是谢谢你的回复~~已经解决了，共同进步！
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19楼2013-05-07 21:05:55
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Rechellijuan

新虫 (小有名气)
你好  什么叫正反引物浓度不对称？我最近做DGGE割胶回收 pcr老是条带弥漫
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20楼2015-07-13 17:52:10
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