应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » dgge最后一次分离切胶后用不带GC夹子引物扩增不出目的条带
52/1返回列表
查看: 1730  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小果冻524

新虫 (小有名气)

[求助] dgge最后一次分离切胶后用不带GC夹子引物扩增不出目的条带

又来请教大家了。如题还是PCR扩增不出，之前用于做DGGE的pcr用B968F-GC和B1401R效果很好，长度不到500bp，现在切完胶要测序了，用B968F扩不出来了，它与B968F-GC的序列是一样的啊，为什么出不来呢？？？？？
        我试了做引物浓度梯度，模板浓度梯度，退火温度梯度，降落PCR也试过了，都不行，不带GC夹的引物几乎都扩出来了！！
        今天用DNA模板做不带GC夹子引物的扩增也出不来，我就搞不明白了，引物序列是一样的，怎么这就结合不上去了！！
        大家快帮我分析分析吧~~~~或者给我推荐几篇文献也好！跪谢啊！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-03-26 22:07:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小果冻524

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by taoqi1986918 at 2013-03-27 16:20:21
试一试MIX吧，可能模板中含有酶抑制剂。

谢谢，问题已经解决，是引物的问题呢
赞一下 回复此楼
15楼2013-03-31 21:13:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

taoqi1986918

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你的胶是用什么方法染色的？切下来的胶是怎么处理的呢？这些都比较关键。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
耐得住寂寞才能拥有繁华！
2楼2013-03-27 06:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小果冻524

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by taoqi1986918 at 2013-03-27 06:01:18
请问你的胶是用什么方法染色的？切下来的胶是怎么处理的呢？这些都比较关键。

gelred染色半小时，切胶后加双蒸水50ul微震荡十来分钟，放冰箱。。
问题是提取的DNA模板也不能用不带GC的引物扩增，只要换引物就残疾
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-27 10:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taoqi1986918

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-03-29 09:37:18
试一试MIX吧，可能模板中含有酶抑制剂。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

小果冻524
耐得住寂寞才能拥有繁华！
4楼2013-03-27 16:20:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人！！！ +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭