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wangning__木虫 (正式写手)
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[求助]
为什么DGGE染色出来是这个样子，高手帮忙分析下原因吧？
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1）这个是我做出来的图，你帮忙看一下，中间很粗的是怎么回事呢？ 2）条带之间这么模糊时什么原因呢，会不会和PCR结果有关呢？如果有关，该怎么改进呢？附上PCR的图。 我配胶用的都是国产的，有的说必须用进口的，是这样吗？你们是使用的哪个公司的呢？ 3）是不是PCR过后最好直接就DGGE呢？ 4）切胶后是不是直接放到离心管中，加入去离子水，放置在4℃就好了呢？大概可以放置多久啊？ 5）我的样品比较多，可能要几块胶，那以后分析时，这几块胶可以对比分析吗？  第一道是Marker,后6个是细菌，最后6个是古菌  细菌PCR，177bp  前六个是古菌，第5个重新扩后，结果和前四个一样了 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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chenguestc
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【答案】应助回帖
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wangning__: 金币+10, ★有帮助 2012-07-19 18:09:26
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 分析的很全面哦 2012-07-20 13:45:41
wangning__: 金币+10, ★有帮助 2012-07-19 18:09:26
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 分析的很全面哦 2012-07-20 13:45:41
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1）这个是我做出来的图，你帮忙看一下，中间很粗的是怎么回事呢？ 带很粗说明拷贝数比较高。 2）条带之间这么模糊时什么原因呢，会不会和PCR结果有关呢？如果有关，该怎么改进呢？附上PCR的图。 带模糊，可以提高点退火温度，将循环数稍微降低一点。 我配胶用的都是国产的，有的说必须用进口的，是这样吗？你们是使用的哪个公司的呢？ 我觉得这个关系不大。 3）是不是PCR过后最好直接就DGGE呢？ 是的。 4）切胶后是不是直接放到离心管中，加入去离子水，放置在4℃就好了呢？大概可以放置多久啊？ 切胶后最好马上做完，用不了多点时间。如果有急事，可以4℃放置过夜是可以。 5）我的样品比较多，可能要几块胶，那以后分析时，这几块胶可以对比分析吗？ 没太明白。楼主的意思是用例如同样的引物不同模板跑出的结果吗？如果是这样的话，是可以用于分析的，但是前提是你最好每板上都加marker，阴阳对照，然后，跑胶的所有条件尤其是时间都一致，这样才好比较，否则，迁移时间不一致，不好分析。 |
3楼2012-07-19 17:07:28
wangning__
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2楼2012-07-19 16:01:09
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4楼2012-07-19 18:11:53
chenguestc
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5楼2012-07-19 20:02:56
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songzifly6楼2012-07-20 10:10:27
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7楼2012-07-21 12:15:44
