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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 半年了，16S rDNA V3区PCR产物弥散，疑似比目的条带大一些些的杂带？
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)

[求助] 半年了，16S rDNA V3区PCR产物弥散，疑似比目的条带大一些些的杂带？已有1人参与

新手，首次发帖，请多指教啊！
半年了，做细菌16S的V3区PCR，目的条带一直P不好（附图）。模板是土壤的总DNA，程序是降落PCR，之后是做DGGE用的。
以前V3区的PCR产物单一而明亮，干脆利落的一条带。可惜现在是越做越出岔子。目的产物迷糊不清，上面还有略大的杂带。以其做模板进行修复PCR后，有时候杂带去除了，可是目的产物一直迷糊暗淡~~
这个是怎么回事呢~？
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1楼2013-11-07 21:07:11
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)
附图。。。
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2楼2013-11-07 21:10:35
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)
.。。
半年了，16S rDNA V3区PCR产物弥散，疑似比目的条带大一些些的杂带？
Administrator 2013-10-08 18 小时 08 分钟_副本.jpg
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3楼2013-11-07 21:14:46
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zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Hazel张健: 金币+2, ★有帮助 2013-11-12 19:08:07
这个是很正常的现象  楼主可以通过增大退火温度，然后增大稀释模板倍数  就是一条带了   我的一条带就是这样做出来的
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4楼2013-11-09 09:22:02
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zq347597638 at 2013-11-09 09:22:02
这个是很正常的现象  楼主可以通过增大退火温度，然后增大稀释模板倍数  就是一条带了   我的一条带就是这样做出来的

都试过~~~
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5楼2013-11-09 17:14:39
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heijiwang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
Hazel张健: 金币+2, ★有帮助 2013-11-12 19:08:22
个是很正常的现象  楼主可以通过增大退火温度到59摄氏度，没问题，另外引物用2微升
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6楼2013-11-11 14:38:39
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史丽娜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

亲，你的MARK是？感觉没在缓冲液里上样
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7楼2014-01-08 15:42:24
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 史丽娜 at 2014-01-08 15:42:24
亲，你的MARK是？感觉没在缓冲液里上样

100bp的。是在缓冲液中上样的~~
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8楼2014-01-23 17:21:57
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