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我爱科学2012

木虫 (正式写手)


[交流] 细菌16sRDNA 用27F和1492R pcr 怎么会有两条带?

细菌16sRDNA  用27F和1492R pcr 怎么会有两条?是引物特异性不好吗?退火温度是55度,72度延伸2min,72度10min,体系:模板1微升,引物各1微升,50微升的体系。电泳图如下:其中3/4/2/5/6/7/8 模板为基因组(试剂盒提取的),1*/3*/4*/5*/8*模板为培养8小时的菌液(即菌落PCR)。  请各位提出宝贵意见,多谢........................
细菌16sRDNA  用27F和1492R pcr 怎么会有两条带?
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我爱科学2012

木虫 (正式写手)


mark为DL2000  第一条带是1490左右,第二条带位置是在580-610bp左右,理论上第二条带是不应该出现的,应该只有第一条带才是正确的。  这是什么原因???
2楼2013-09-08 11:05:05
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dongge2013

金虫 (小有名气)



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引用回帖:
2楼: Originally posted by 我爱科学2012 at 2013-09-08 11:05:05
mark为DL2000  第一条带是1490左右,第二条带位置是在580-610bp左右,理论上第二条带是不应该出现的,应该只有第一条带才是正确的。  这是什么原因???

我做过很多次条带都很特异,用的20微升体系,我想看下你合成的引物序列是不是有问题?
3楼2013-09-10 08:24:27
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dongge2013

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你想做细菌鉴定吗?我们可以帮你做,鉴定到属种都可以
4楼2013-09-10 08:34:02
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muji9908

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你要是怀疑是annealing temp不对,就做个梯度pcr呗
5楼2013-11-17 10:31:50
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匿名

用户注销 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
6楼2014-12-20 10:44:53
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