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忘忧草_

木虫 (正式写手)

[求助] M13通用引物为什么有这么多种？

最近发现M13通用引物为什么有这么多种啊？在生工网站上看到有：
        M13/pUC Sequencing Primer(-20)        d(GTA AAA CGA CGG CCA GT)       
        M13/pUC Sequencing Primer(-40)        d(GTT TTC CCA GTC ACG AC)               
        M13/pUC Sequencing Primer(-47)        d(CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC)       
        M13/pUC Reverse Sequencing Primer        d(AAC AGC TAT GAC CAT G)       
        M13/pUC Reverse Sequencing Primer (-48)        d(AGC GGA TAA CAA TTT CAC ACA GGA)       

他们之间有社么区别吗？
怎么使用啊？
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不将就
1楼 2013-08-28 21:13:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
忘忧草_: 金币+22, ★★★很有帮助 2013-08-29 09:18:34
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-29 13:23:15
引物的位置和长度稍有不同。引物长短不同影响PCR时的退火温度。位置主要是因为测序时靠近引物的序列信号差，如果你克隆插入时所用的酶切位点比较靠近多克隆位点的末端，需要用离得稍微远一些的引物才能完全测出插入片段的序列。如果你只是用于一般的PCR检测，只要选取两个退火温度匹配是上下游引物就行了。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

忘忧草_
2楼2013-08-28 22:24:14
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-28 22:24:14
引物的位置和长度稍有不同。引物长短不同影响PCR时的退火温度。位置主要是因为测序时靠近引物的序列信号差，如果你克隆插入时所用的酶切位点比较靠近多克隆位点的末端，需要用离得稍微远一些的引物才能完全测出插入 ...

恩 谢谢您 也就是说用那种都可以了
我用的是takara的pMD™19-T Vector Cloning Kit，里面说“对克隆后对的PCR产物使用BcaBEST Sequencing primers、M13 Primers 进行DNA测序” 我不太理解这里说的是他们是一对引物还是分别是一些列的引物呢？还有就是引物序列是什么啊？
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不将就
3楼2013-08-29 09:22:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 13:23:22
忘忧草_: 金币+22, ★★★很有帮助 2013-08-29 14:56:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by 忘忧草_ at 2013-08-29 09:22:01
恩 谢谢您 也就是说用那种都可以了
我用的是takara的pMD™19-T Vector Cloning Kit，里面说“对克隆后对的PCR产物使用BcaBEST Sequencing primers、M13 Primers 进行DNA测序” 我不太理解这里说的是他们是一 ...

pMD-19T的插入位点在比较中间，任何引物都可以用来测序的。如果你的插入序列在700bp一下，用一个引物就可以了。如果序列在700bp-1.4kb之间，需要用正反一对引物从两边测。如果超过1.4kb，需要根据两边测序结果再设计中间的引物才能测通。
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4楼2013-08-29 12:56:51
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-29 12:56:51
pMD-19T的插入位点在比较中间，任何引物都可以用来测序的。如果你的插入序列在700bp一下，用一个引物就可以了。如果序列在700bp-1.4kb之间，需要用正反一对引物从两边测。如果超过1.4kb，需要根据两边测序结果再设 ...

恩 明白了 谢谢您
我现在想合成引物对重组子进行菌落PCR验证，那用那对引物呢？还是都可以啊
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不将就
5楼2013-08-29 14:58:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 忘忧草_ at 2013-08-29 14:58:32
恩 明白了 谢谢您
我现在想合成引物对重组子进行菌落PCR验证，那用那对引物呢？还是都可以啊...

菌落PCR的话随便选一对就可以了。注意一下匹配上下游引物和退火温度。
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6楼2013-08-30 00:31:29
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-30 00:31:29
菌落PCR的话随便选一对就可以了。注意一下匹配上下游引物和退火温度。...

非常感谢！
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不将就
7楼2013-08-30 10:01:29
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