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461241086

新虫 (初入文坛)

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[交流] 用18T载体的通用引物进行筛选阳性菌液，跑出来的条带大小不对。。。

我用的是18T载体的M13通用引物做的菌液pcr（共挑10个单克隆），目的片段是3kb,可电泳条带全部都是800~1000bp的，不知是为什么，求高人指点。

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1楼 2011-11-07 19:47:49

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wjswj

木虫 (正式写手)

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M13引物和你的片段上有结合位点，可以假引发？？

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2楼2011-11-08 10:16:55

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461241086

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by wjswj at 2011-11-08 10:16:55:
M13引物和你的片段上有结合位点，可以假引发？？

我检测了一下，没有非特异性结合

3楼2011-11-08 11:51:21

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A406

新虫 (初入文坛)

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延伸时间够不够？也有可能连的基因不是你的目的基因

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4楼2011-11-08 13:17:43

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hellolin

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连接没连好，3K是不是连接有点困难的。。

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5楼2011-11-08 14:53:46

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imdiablo1

至尊木虫 (知名作家)

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是延伸时间的问题吧~~

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9楼2011-11-08 16:09:28

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imdiablo1

至尊木虫 (知名作家)

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纠结啊。。

10楼2011-11-08 16:09:34

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zhfge

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像这种大片段我从来不做整个insert的菌检的，我向来都是从基因上设计一堆引物，与载体引物一起做菌检的。
大片段的菌检不是太好P的。

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11楼2011-11-09 20:21:17

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小鱼儿530530

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你后来是怎么解决的，我也遇到同样的结果。。。

12楼2014-08-11 16:55:13

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lvshilu

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800~1000bp会不会就是空载体M13F+R的跨度啊，或者是空载体的M13F+R的跨度+引物二聚体的长度？

13楼2014-08-11 17:28:54

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jurkat.1640

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插入的产物不对，连接产物不纯吧

14楼2014-08-12 15:09:37

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简单回复

clarktao6楼

2011-11-08 15:45 回复

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clarktao7楼

2011-11-08 15:45 回复

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liuxing1-18楼

2011-11-08 16:07 回复

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