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461241086

新虫 (初入文坛)


[交流] 用18T载体的通用引物进行筛选阳性菌液,跑出来的条带大小不对。。。

我用的是18T载体的M13通用引物做的菌液pcr(共挑10个单克隆),目的片段是3kb,可电泳条带全部都是800~1000bp的,不知是为什么,求高人指点。
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wjswj

木虫 (正式写手)



461241086(金币+1):谢谢参与
M13引物和你的片段上有结合位点,可以假引发??
2楼2011-11-08 10:16:55
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461241086

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by wjswj at 2011-11-08 10:16:55:
M13引物和你的片段上有结合位点,可以假引发??

我检测了一下,没有非特异性结合
3楼2011-11-08 11:51:21
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A406

新虫 (初入文坛)



461241086(金币+1):谢谢参与
延伸时间够不够?也有可能连的基因不是你的目的基因
4楼2011-11-08 13:17:43
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hellolin

金虫 (小有名气)



461241086(金币+1):谢谢参与
连接没连好,3K是不是连接有点困难的。。
5楼2011-11-08 14:53:46
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461241086(金币+1):谢谢参与
是延伸时间的问题吧~~
9楼2011-11-08 16:09:28
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461241086(金币+1):谢谢参与
纠结啊。。
10楼2011-11-08 16:09:34
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zhfge

铜虫 (初入文坛)



461241086(金币+1):谢谢参与
像这种大片段我从来不做整个insert的菌检的,我向来都是从基因上设计一堆引物,与载体引物一起做菌检的。
大片段的菌检不是太好P的。
11楼2011-11-09 20:21:17
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小鱼儿530530

新虫 (初入文坛)



461241086(金币+1): 谢谢参与
你后来是怎么解决的,我也遇到同样的结果。。。
12楼2014-08-11 16:55:13
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lvshilu

新虫 (小有名气)



461241086(金币+1): 谢谢参与
800~1000bp会不会就是空载体M13F+R的跨度啊,或者是空载体的M13F+R的跨度+引物二聚体的长度?
13楼2014-08-11 17:28:54
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)



461241086(金币+1): 谢谢参与
插入的产物不对,连接产物不纯吧
14楼2014-08-12 15:09:37
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简单回复
clarktao6楼
2011-11-08 15:45   回复  
461241086(金币+1):谢谢参与
clarktao7楼
2011-11-08 15:45   回复  
461241086(金币+1):谢谢参与
2011-11-08 16:07   回复  
461241086(金币+1):谢谢参与
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