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我爱科学2012

超级版主

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[交流] 细菌16sRDNA 用27F和1492R pcr 怎么会有两条带？

细菌16sRDNA  用27F和1492R pcr 怎么会有两条？是引物特异性不好吗？退火温度是55度，72度延伸2min，72度10min，体系：模板1微升，引物各1微升，50微升的体系。电泳图如下：其中3/4/2/5/6/7/8 模板为基因组（试剂盒提取的），1*/3*/4*/5*/8*模板为培养8小时的菌液（即菌落PCR）。  请各位提出宝贵意见，多谢........................
细菌16sRDNA  用27F和1492R pcr 怎么会有两条带？
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1楼 2013-09-08 11:02:05
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我爱科学2012

实习版主

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mark为DL2000  第一条带是1490左右，第二条带位置是在580-610bp左右，理论上第二条带是不应该出现的，应该只有第一条带才是正确的。  这是什么原因？？？
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2楼2013-09-08 11:05:05
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dongge2013

主管区长

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 我爱科学2012 at 2013-09-08 11:05:05
mark为DL2000  第一条带是1490左右，第二条带位置是在580-610bp左右，理论上第二条带是不应该出现的，应该只有第一条带才是正确的。  这是什么原因？？？

我做过很多次条带都很特异，用的20微升体系，我想看下你合成的引物序列是不是有问题？
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3楼2013-09-10 08:24:27
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dongge2013

超级版主

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你想做细菌鉴定吗？我们可以帮你做，鉴定到属种都可以
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4楼2013-09-10 08:34:02
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muji9908

主管区长

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你要是怀疑是annealing temp不对，就做个梯度pcr呗
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5楼2013-11-17 10:31:50
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匿名

主管区长

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6楼2014-12-20 10:44:53
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