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细菌16sRDNA 用27F和1492R pcr 怎么会有两条带?
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我爱科学2012
木虫
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[交流]
细菌16sRDNA 用27F和1492R pcr 怎么会有两条带?
细菌16sRDNA 用27F和1492R pcr 怎么会有两条?是引物特异性不好吗?退火温度是55度,72度延伸2min,72度10min,体系:模板1微升,引物各1微升,50微升的体系。电泳图如下:其中3/4/2/5/6/7/8 模板为基因组(试剂盒提取的),1*/3*/4*/5*/8*模板为培养8小时的菌液(即菌落PCR)。 请各位提出宝贵意见,多谢........................
2013.09.06-.jpg
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2013-09-08 11:02:05
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dongge2013
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你想做细菌鉴定吗?我们可以帮你做,鉴定到属种都可以
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2013-09-10 08:34:02
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我爱科学2012
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mark为DL2000 第一条带是1490左右,第二条带位置是在580-610bp左右,理论上第二条带是不应该出现的,应该只有第一条带才是正确的。 这是什么原因???
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2楼
2013-09-08 11:05:05
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dongge2013
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我爱科学2012
at 2013-09-08 11:05:05
mark为DL2000 第一条带是1490左右,第二条带位置是在580-610bp左右,理论上第二条带是不应该出现的,应该只有第一条带才是正确的。 这是什么原因???
我做过很多次条带都很特异,用的20微升体系,我想看下你合成的引物序列是不是有问题?
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3楼
2013-09-10 08:24:27
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muji9908
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你要是怀疑是annealing temp不对,就做个梯度pcr呗
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5楼
2013-11-17 10:31:50
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