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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】扩16s rDNA时，以第一次的条带较淡的PCR产物为模板，为什么得不到清晰的
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】扩16s rDNA时，以第一次的条带较淡的PCR产物为模板，为什么得不到清晰的

扩革兰氏阴性菌的16s rDNA时（菌体PCR)，想得到较亮的条带，以第一次的条带较淡的PCR产物为模板，在同样的条件下，为什么得不到清晰的条带？这个方法以前用过，都很好用。恳请各位指教！
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1楼 2011-04-01 09:51:59
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
★
wish0310(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by wish0310 at 2011-04-01 09:51:59:
扩革兰氏阴性菌的16s rDNA时（菌体PCR)，想得到较亮的条带，以第一次的条带较淡的PCR产物为模板，在同样的条件下，为什么得不到清晰的条带？这个方法以前用过，都很好用。恳请各位指教！

体系里可能存在抑制性东西
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3楼2011-04-01 10:35:23
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wang_xju

新虫 (初入文坛)
★
wish0310(金币+1):谢谢参与
你稀释模版至少100倍试试，或者更高倍数。
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4楼2011-04-01 11:11:10
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tigerpaw

木虫 (正式写手)
★
wish0310(金币+1):谢谢参与
是不是胶的问题？
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5楼2011-04-01 11:12:45
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by -超越beyond at 2011-04-01 10:35:23:
体系里可能存在抑制性东西

比如？
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6楼2011-04-01 12:09:24
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by tigerpaw at 2011-04-01 11:12:45:
是不是胶的问题？

应该不是，因为我跑了三次，胶是不同的，但结果都一样。
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7楼2011-04-01 12:10:19
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wang_xju at 2011-04-01 11:11:10:
你稀释模版至少100倍试试，或者更高倍数。

但是不管怎么说，不稀释的情况下，至少应该有一条带比较明显吧？请指教一下可以吗？谢谢！
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8楼2011-04-01 12:12:31
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2008228003

铁虫 (小有名气)
★
wish0310(金币+1):谢谢参与
是不是条件不好，目的基因根本没克隆出来，看到的只不过是引物二聚体
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9楼2011-04-01 12:38:32
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 2008228003 at 2011-04-01 12:38:32:
是不是条件不好，目的基因根本没克隆出来，看到的只不过是引物二聚体

第一次的PCR产物是1.5kb左右，条带虽然浅，但还是能看出来的。
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10楼2011-04-01 21:27:32
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wish0310 at 2011-04-01 12:09:24:
比如？

你可以适量加入BSA
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11楼2011-04-02 17:58:06
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priorpost06

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
wish0310(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-04-03 09:17:37
如果DNA模板是新的，可能就是引物问题，引物浓度不够或是特异性不强，都会导致条带的暗淡。最后制胶体加入EB。引物长时间放置会影响PCR的效果。
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12楼2011-04-02 20:42:47
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liugs

禁虫 (正式写手)
★
wish0310(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
13楼2011-04-03 14:25:27
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媛媛12232楼
2011-04-01 10:07   回复  
wish0310(金币+1):谢谢参与
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