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wish0310

至尊木虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】扩16s rDNA时,以第一次的条带较淡的PCR产物为模板,为什么得不到清晰的

扩革兰氏阴性菌的16s rDNA时(菌体PCR),想得到较亮的条带,以第一次的条带较淡的PCR产物为模板,在同样的条件下,为什么得不到清晰的条带?这个方法以前用过,都很好用。恳请各位指教!
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)



wish0310(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by wish0310 at 2011-04-01 09:51:59:
扩革兰氏阴性菌的16s rDNA时(菌体PCR),想得到较亮的条带,以第一次的条带较淡的PCR产物为模板,在同样的条件下,为什么得不到清晰的条带?这个方法以前用过,都很好用。恳请各位指教!

体系里可能存在抑制性东西
3楼2011-04-01 10:35:23
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wang_xju

新虫 (初入文坛)



wish0310(金币+1):谢谢参与
你稀释模版至少100倍试试,或者更高倍数。
4楼2011-04-01 11:11:10
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tigerpaw

木虫 (正式写手)



wish0310(金币+1):谢谢参与
是不是胶的问题?
5楼2011-04-01 11:12:45
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by -超越beyond at 2011-04-01 10:35:23:
体系里可能存在抑制性东西

比如?
6楼2011-04-01 12:09:24
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by tigerpaw at 2011-04-01 11:12:45:
是不是胶的问题?

应该不是,因为我跑了三次,胶是不同的,但结果都一样。
7楼2011-04-01 12:10:19
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by wang_xju at 2011-04-01 11:11:10:
你稀释模版至少100倍试试,或者更高倍数。

但是不管怎么说,不稀释的情况下,至少应该有一条带比较明显吧?请指教一下可以吗?谢谢!
8楼2011-04-01 12:12:31
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2008228003

铁虫 (小有名气)



wish0310(金币+1):谢谢参与
是不是条件不好,目的基因根本没克隆出来,看到的只不过是引物二聚体
9楼2011-04-01 12:38:32
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by 2008228003 at 2011-04-01 12:38:32:
是不是条件不好,目的基因根本没克隆出来,看到的只不过是引物二聚体

第一次的PCR产物是1.5kb左右,条带虽然浅,但还是能看出来的。
10楼2011-04-01 21:27:32
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by wish0310 at 2011-04-01 12:09:24:
比如?

你可以适量加入BSA
11楼2011-04-02 17:58:06
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priorpost06

至尊木虫 (著名写手)


★ ★ ★
wish0310(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-04-03 09:17:37
如果DNA模板是新的,可能就是引物问题,引物浓度不够或是特异性不强,都会导致条带的暗淡。最后制胶体加入EB。引物长时间放置会影响PCR的效果。
12楼2011-04-02 20:42:47
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liugs

禁虫 (正式写手)


wish0310(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽

13楼2011-04-03 14:25:27
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2011-04-01 10:07   回复  
wish0310(金币+1):谢谢参与
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