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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请各位虫友帮我分析一下，为什么 我的DGGE没有条带呀！！！！！！！！！
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

[求助] 请各位虫友帮我分析一下，为什么 我的DGGE没有条带呀！！！！！！！！！ 已有1人参与

图1：肠道双歧杆菌的PCR产物，510BP


图2：DGGE图，45－55的梯度。条带这么少？。。。。。有的完全没有条带！


图3：调成40－70后，加3微升的量，仍然没有条带。还变成黑乎乎的一片了！




虫友位帮我分析下，这是个什么情况嘛？

图1
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为自己加油
1楼 2011-11-18 20:47:50
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
补图

图2



图3
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为自己加油
2楼2011-11-18 20:51:19
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
没人啊？
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为自己加油
3楼2011-11-19 00:49:22
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
在线等呀
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为自己加油
4楼2011-11-19 14:11:48
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

wwsw38(金币+3): 谢谢你的回答。图2我只加1微升的样，有的条带就很亮了。加3微就黑了，所以不敢多加啊 2011-11-19 16:18:07
1. PCR产物挺好的，目标条带亮，没有非特异性扩增。
2. LZ你讲，你的DGGE加样3微升？这么少。我们一般都是20-30ul的样子呀。
3.第一个DGGE图挺正常的，也许你的样品中的条带种类本来就少。呵呵。PCR产物扩增好最好马上或者间隔不要超过12h去DGGE，相信LZ不会有这个问题。
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5楼2011-11-19 15:39:58
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-11-19 15:39:58:
1. PCR产物挺好的，目标条带亮，没有非特异性扩增。
2. LZ你讲，你的DGGE加样3微升？这么少。我们一般都是20-30ul的样子呀。
3.第一个DGGE图挺正常的，也许你的样品中的条带种类本来就少。呵呵。PCR产物扩增好最 ...

双歧杆菌的条带原本就有点少，但也不至于只有一两条呀呜呜。
何况有的完全就没有条带，但是PCR产物这么亮，为什么会没有条带呢？想不通
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为自己加油
6楼2011-11-19 16:20:44
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pcl-bunny

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-24 10:36:23
不知道具体哪里出了问题，可能有以下几方面：
1，引物必须带GC夹子。
2，上样为20~40微。
3，可能变性梯度不适合。
4，做胶出了问题。
5，建议电泳条件：80V，12小时。
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NOPAIN,NOGAIN!
7楼2011-11-20 14:25:25
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cgspider

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-24 10:36:42
上面的童鞋，我的DGGE结果都是没有明显的成形条带，整个泳道都很亮，就是么的条带，什么意思啊？

我上样量做了一个梯度从5微升---30微升，85V，16h 和 200V，4h 都是这个结果，whywhywhy，PCR结果都很好的 ，我还做了胶回收。。。
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你的能力撑不起你的野心
8楼2011-11-24 10:35:08
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琪瑶儿

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5): 鼓励新虫，谢谢交流哦~ 2011-12-26 11:29:38
我觉得是胶的问题，建议楼主跑浓度范围大一些的，看一下，是否还是这样的。
然后根据图谱的结果，再选取合适的浓度梯度为实验梯度
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海洋环境微生物《DGGE，海洋污染修复
9楼2011-11-24 10:59:10
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pcl-bunny

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很可能是梯度没灌好，导致无法形成条带。
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NOPAIN,NOGAIN!
10楼2011-11-24 14:38:16
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