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puppypuppylove

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
scelab(金币+2): 谢谢热心回复~ 2011-12-26 11:30:11
如果不能确定是什么原因照成条带这么少的话,可以建个小文库,随机挑几十个克隆,测测就知道是不是因为本身菌的种类就少,造成的条带少。
11楼2011-12-05 08:57:03
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周梦怡

木虫 (小有名气)

你好 楼主
我最近在做DGGE 发现在梳孔那凝的很慢 请问你加了多少体积的APS和TEMED?我都加了千分之一的体积

急!
12楼2011-12-13 10:06:42
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xiyao-1987

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
scelab(金币+5): 鼓励新虫,谢谢交流哦~~~ 2011-12-26 11:30:35
可能本来样品条带就很少吧,或者换一下缓冲液试试!
13楼2011-12-26 10:30:35
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攸攸乐也

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by wwsw38 at 2011-11-18 20:47:50:
图1:肠道双歧杆菌的PCR产物,510BP


图2:DGGE图,45-55的梯度。条带这么少?。。。。。有的完全没有条带!


图3:调成40-70后,加3微升的量,仍然没有条带。还变成黑乎乎的一片了!




虫友位帮 ...

楼主最近做的咋样了?跑出条带没?我也是做DGGE跑不出条带!不知道什么原因呢?试剂全部重新配的,样品是重新跑P的。但就是什么都跑不出来。同样的样品,我九月份跑的还挺好,很多条带。。。
14楼2011-12-30 14:10:19
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在雨中

金虫 (著名写手)


引用回帖:
1楼: Originally posted by 攸攸乐也 at 2011-12-30 14:10:19:
楼主最近做的咋样了?跑出条带没?我也是做DGGE跑不出条带!不知道什么原因呢?试剂全部重新配的,样品是重新跑P的。但就是什么都跑不出来。同样的样品,我九月份跑的还挺好,很多条带。。。

这个跟人品也有关系的。呵呵。
注意实验细节。你会成功的。
15楼2011-12-30 17:09:41
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
153208楼: Originally posted by 周梦怡 at 2011-12-13 10:06:42:
你好 楼主
我最近在做DGGE 发现在梳孔那凝的很慢 请问你加了多少体积的APS和TEMED?我都加了千分之一的体积

急!

我也是孔那里凝的最慢,不过一般一个半小时到两个小时就可以全部凝了。你等两个小时,如果还是没凝考虑换一下新鲜的10%APS,再有问题就加大TEMED的量一点吧。
16楼2012-05-09 13:09:45
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实验小生

新虫 (初入文坛)

zhang8826857: 编辑内容 2012-06-21 22:34
DGGE变性梯度凝胶电泳:
使用PCR方法扩增特定环境样品中混合细菌16S rDNA,通过变性梯度凝胶电泳分析环境样品中的细菌群落结构;将凝胶电泳条带回收后克隆测序,确定细菌种属关系,获得特定样品中的细菌多样性信息。

[ Last edited by zhang8826857 on 2012-6-21 at 22:34 ]
17楼2012-06-21 10:42:43
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开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你好,我最近也碰到了这样的情况,所有试剂样品都是新的,PCR也是好的,跑DGGE都是空白,不知道你是怎么解决的?谢谢
挥霍不起青春
18楼2014-01-01 18:43:19
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zhang226296

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 实验小生 at 2012-06-21 10:42:43
DGGE变性梯度凝胶电泳:
使用PCR方法扩增特定环境样品中混合细菌16S rDNA,通过变性梯度凝胶电泳分析环境样品中的细菌群落结构;将凝胶电泳条带回收后克隆测序,确定细菌种属关系,获得特定样品中的细菌多样性信息 ...

想问问你是怎解决的,我上半部分全是黑的,也不知道是不是弥散,80v,16h,8%,不管什么梯度比如40-60%,50-70%都是这样的,试剂,DNA都换的新的,还是这个结果,我已经找不出原因了,求赐教啊
请各位虫友帮我分析一下,为什么 我的DGGE没有条带呀!!!!!!!!!
GDO@T_C6}IBUIK206~TF5~9.jpg

19楼2014-04-10 16:42:30
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