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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请各位虫友帮我分析一下，为什么 我的DGGE没有条带呀！！！！！！！！！
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puppypuppylove

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
scelab(金币+2): 谢谢热心回复~ 2011-12-26 11:30:11
如果不能确定是什么原因照成条带这么少的话，可以建个小文库，随机挑几十个克隆，测测就知道是不是因为本身菌的种类就少，造成的条带少。
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11楼2011-12-05 08:57:03
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周梦怡

木虫 (小有名气)
你好 楼主
我最近在做DGGE 发现在梳孔那凝的很慢 请问你加了多少体积的APS和TEMED？我都加了千分之一的体积

急！
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12楼2011-12-13 10:06:42
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xiyao-1987

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab(金币+5): 鼓励新虫，谢谢交流哦~~~ 2011-12-26 11:30:35
可能本来样品条带就很少吧，或者换一下缓冲液试试！
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13楼2011-12-26 10:30:35
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攸攸乐也

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by wwsw38 at 2011-11-18 20:47:50:
图1：肠道双歧杆菌的PCR产物，510BP


图2：DGGE图，45－55的梯度。条带这么少？。。。。。有的完全没有条带！


图3：调成40－70后，加3微升的量，仍然没有条带。还变成黑乎乎的一片了！




虫友位帮 ...

楼主最近做的咋样了？跑出条带没？我也是做DGGE跑不出条带！不知道什么原因呢？试剂全部重新配的，样品是重新跑P的。但就是什么都跑不出来。同样的样品，我九月份跑的还挺好，很多条带。。。
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14楼2011-12-30 14:10:19
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在雨中

金虫 (著名写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 攸攸乐也 at 2011-12-30 14:10:19:
楼主最近做的咋样了？跑出条带没？我也是做DGGE跑不出条带！不知道什么原因呢？试剂全部重新配的，样品是重新跑P的。但就是什么都跑不出来。同样的样品，我九月份跑的还挺好，很多条带。。。

这个跟人品也有关系的。呵呵。
注意实验细节。你会成功的。
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15楼2011-12-30 17:09:41
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
153208楼: Originally posted by 周梦怡 at 2011-12-13 10:06:42:
你好 楼主
我最近在做DGGE 发现在梳孔那凝的很慢 请问你加了多少体积的APS和TEMED？我都加了千分之一的体积

急！

我也是孔那里凝的最慢，不过一般一个半小时到两个小时就可以全部凝了。你等两个小时，如果还是没凝考虑换一下新鲜的10%APS，再有问题就加大TEMED的量一点吧。
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16楼2012-05-09 13:09:45
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实验小生

新虫 (初入文坛)
zhang8826857: 编辑内容 2012-06-21 22:34
DGGE变性梯度凝胶电泳：
使用PCR方法扩增特定环境样品中混合细菌16S rDNA，通过变性梯度凝胶电泳分析环境样品中的细菌群落结构；将凝胶电泳条带回收后克隆测序，确定细菌种属关系，获得特定样品中的细菌多样性信息。

[ Last edited by zhang8826857 on 2012-6-21 at 22:34 ]
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17楼2012-06-21 10:42:43
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开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你好，我最近也碰到了这样的情况，所有试剂样品都是新的，PCR也是好的，跑DGGE都是空白，不知道你是怎么解决的？谢谢
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挥霍不起青春
18楼2014-01-01 18:43:19
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zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 实验小生 at 2012-06-21 10:42:43
DGGE变性梯度凝胶电泳：
使用PCR方法扩增特定环境样品中混合细菌16S rDNA，通过变性梯度凝胶电泳分析环境样品中的细菌群落结构；将凝胶电泳条带回收后克隆测序，确定细菌种属关系，获得特定样品中的细菌多样性信息 ...

想问问你是怎解决的，我上半部分全是黑的，也不知道是不是弥散，80v,16h,8%,不管什么梯度比如40-60%，50-70%都是这样的，试剂，DNA都换的新的，还是这个结果，我已经找不出原因了，求赐教啊
请各位虫友帮我分析一下，为什么 我的DGGE没有条带呀！！！！！！！！！
GDO@T_C6}IBUIK206~TF5~9.jpg
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19楼2014-04-10 16:42:30
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