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遇见林

铁虫 (初入文坛)

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[交流] DGGE条带分不开

最近做DGGE老是出现如下状况请各位同行帮忙分析下：
实验条件：用的是Bio-Rad475型梯度混合装置。做的是污水生物处理过程污泥中亚硝酸盐氧化菌（Nosz），引物F968，R1401，约430bp。
图一：胶浓度8%，变性剂浓度范围是30%-50%，电泳温度60°C。电压120V，电泳7小时。TEMED20微升，100微升10%的APS。
图二：胶浓度6%，变性剂浓度范围是35%-45%，电泳温度60°C。电压70V，电泳14小时。TEMED20微升，100微升10%的APS。
附图三是P出的结果，感觉不是PCR的问题。PCR是50微升体系，引物2微升，模板5微升，mastermix25微升，加水补齐。
请各位大侠找找问题出在哪儿？？？？谢谢啦。。。

图一

图二

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1楼 2012-08-26 10:20:41

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遇见林

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by ygbxk at 2012-08-26 16:23:17
你可以做一个总细菌的引物看看，如果没问题就是引物的问题了，还有问题就是电泳的问题了。可能性挺多，如果你用的药品时间较长或者被冰冻过，可能也出现这种情况，其它原因就不好说了，可能你得慢慢摸索。另外反硝化 ...

我们的药品都是放四度冰箱里的。。O(∩_∩)O谢谢。。