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1楼2014-08-01 22:31:08

小甜点fly

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有没有做过相关课题的前辈啊？

2楼2014-08-01 22:45:18

爱睡猪

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【答案】应助回帖

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小甜点fly(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-03 19:04:25

说明菌丰度差距很大啊，有的已经很亮了，有的还是很淡的，考虑增加循环数到35试试，200V完了之后电压低点跑久点，你的条带还离点样孔很近，说不定还有没出来或者没分开的

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ControlMyself

3楼2014-08-03 10:38:00

小甜点fly

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3楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2014-08-03 10:38:00
说明菌丰度差距很大啊，有的已经很亮了，有的还是很淡的，考虑增加循环数到35试试，200V完了之后电压低点跑久点，你的条带还离点样孔很近，说不定还有没出来或者没分开的

恩恩，好的，非常感谢。以后确定条件了可以过夜跑，电压低效果应该会好些。还请问下引物二聚体对DGGE会不会有影响？

4楼2014-08-04 09:22:28

yuheng19831123

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变性剂范围可以缩小不啊可以尝试低电压长时间试试

银染要清晰些吧

5楼2014-08-20 19:15:43

biolinker

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 小甜点fly at 2014-08-04 09:22:28
恩恩，好的，非常感谢。以后确定条件了可以过夜跑，电压低效果应该会好些。还请问下引物二聚体对DGGE会不会有影响？...

引物二聚体对后面跑DGGE胶是有影响的。

6楼2014-08-21 13:16:58

小甜点fly

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5楼: Originally posted by yuheng19831123 at 2014-08-20 19:15:43
变性剂范围可以缩小不啊可以尝试低电压长时间试试

银染要清晰些吧

变形梯度的确定是之前做了一个垂直电泳，S型曲线，然后确定了变形梯度是40-70%，之后按照这个范围试了几次有35%-75%、35%-70%、40%-75%，发现40-75%的好些。垂直电泳做出来的不是很准确么？而且我觉得虽然确定了梯度但是每次做出来也都不太一样。

7楼2014-08-23 14:16:50

小甜点fly

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6楼: Originally posted by biolinker at 2014-08-21 13:16:58
引物二聚体对后面跑DGGE胶是有影响的。...

好的，谢谢。目前现在通过优化PCR条件不能去除引物二聚体，请问您有什么建议么？引物是按照看过的文献里面选择合成的。

8楼2014-08-23 14:19:10

Shiong1314

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7楼: Originally posted by 小甜点fly at 2014-08-23 14:16:50
变形梯度的确定是之前做了一个垂直电泳，S型曲线，然后确定了变形梯度是40-70%，之后按照这个范围试了几次有35%-75%、35%-70%、40%-75%，发现40-75%的好些。垂直电泳做出来的不是很准确么？而且我觉得虽然确定了梯 ...

LZ，我想问一下，我要配置35%-75%、35%-70%、40%-75%这些梯度的胶应该怎么配啊

9楼2017-06-30 15:11:40