| 查看: 3083 | 回复: 8 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
新人求助：DGGE电泳问题，条带不够清晰 已有2人参与
|
||
|
新人做DGGE，求助~~~ DGGE电泳分析大肠菌群。提取粪便DNA，引物：GC-F338,R518，片段230bp，50μPCR体系：Mix25μ，引物1μ*2，DNA模板1μ（400ng）。PCR程序：94℃ 2min；94℃ 30s，57℃ 30s，72℃ 30s，*30次循环；72℃ 2min。退火温度已经做过梯度，57和58度较好，但琼脂糖跑胶发现除230bp以外还有一50bp左右的杂带，应该是引物二聚体（温度梯度下引物二聚体的量并没有明显改变）。 10%胶浓度，40%-75%变性梯度（垂直电泳变性区域40%-70%），一般30或40μl上样，PCR产物：buffer=25：10。预电泳200V，20min-30min。电泳150V ，5h。 目前的主要问题:引物二聚体会不会影响DGGE效果？DGGE图有的条带都不是很清晰，不清晰分析也很成问题，正常应该是一条细细的条带，是PCR的问题还是胶有问题？还需要怎样优化？  20140801 4样品.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有248人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助 ，DGGE 条带不清晰，弥散
已经有5人回复
- DGGE预电泳的问题
已经有9人回复
- DGGE图模糊，没有特别亮的条带是什么原因
已经有7人回复
- 大家看看我的DGGE跑的怎么样，有什么问题么
已经有14人回复
- PCR条带不够亮的原因
已经有22人回复
- 做DGGE的相关问题
已经有8人回复
- DGGE 垂直电泳 灌胶技术 各位大侠帮帮忙
已经有13人回复
- DGGE电泳高手请进，看看这个30%-60%的胶梯度合理不？有图求真相！！！
已经有14人回复
- DGGE条带分不开
已经有19人回复
- DGGE ladder 或者 marker制作的问题
已经有5人回复
- 如何用quantity one对DGGE电泳条带进行数字化
已经有4人回复
- 求助-TGGE和DGGE的电泳图谱
已经有3人回复
- 求高手帮我看看DGGE图片，为什么跑不开，非常感谢
已经有32人回复
- 用Quantity one分析DGGE电泳结果，如果计算Shannon多样性指数
已经有11人回复
- DGGE图的条带问题~~求助！希望高手帮助指点
已经有6人回复
- DGGE电泳为什么要预热电泳缓冲液到60度？
已经有4人回复
- DGGE预电泳问题
已经有11人回复
- 关于DGGE的应用
已经有6人回复
- DGGE电泳的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于DGGE电泳仪的改装
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于变性梯度凝胶电泳(DGGE)
已经有17人回复
yuheng19831123
新虫 (初入文坛)
- MolEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 139.2
- 帖子: 49
- 在线: 8.2小时
- 虫号: 532379
- 注册: 2008-03-25
- 专业: 环境微生物学
5楼2014-08-20 19:15:43
2楼2014-08-01 22:45:18
3楼2014-08-03 10:38:00
4楼2014-08-04 09:22:28
20
