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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带不够亮的原因

pcr产物跑琼脂糖,条带不够亮,已经重复了很多次还是不够亮,为什么呢?
下一步想要做dgge,可以继续么?
PCR条带不够亮的原因
0821pcr.JPG
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pypsak

金虫 (正式写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-22 16:54:39
木有marker对照,不知道哪里出问题了
2楼2013-08-22 09:28:43
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shiq250

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-28 13:52:16
请提供marker 有可能是PCR产物浓度很低
3楼2013-08-22 09:33:15
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-22 16:54:55
没有DNAmarker,不过从图片上看楼主的电泳中并没有可用条带啊    而且跑电泳时间好像也短了,需要跑整个胶的2/3方可  楼主跑的是1%琼胶吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
4楼2013-08-22 09:56:37
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pypsak at 2013-08-22 09:28:43
木有marker对照,不知道哪里出问题了

之前跑过带marker的,marker也是不亮,但是看到别人做过也有marker不亮但是pcr产物条带很亮的,为什么我的做来做去都还是不亮呢?
5楼2013-08-22 13:04:09
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shiq250 at 2013-08-22 09:33:15
请提供marker 有可能是PCR产物浓度很低

那怎样才能提高pcr浓度呢?改变退火温度?
6楼2013-08-22 13:05:18
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hkqgeoffrey at 2013-08-22 09:56:37
没有DNAmarker,不过从图片上看楼主的电泳中并没有可用条带啊    而且跑电泳时间好像也短了,需要跑整个胶的2/3方可  楼主跑的是1%琼胶吗?

没有可用的条带??那我的条带是什么??我一般都是跑20min,基本在1/3-1/2处,用的是1%琼胶,那我是不是需要延长下时间呢
7楼2013-08-22 13:07:26
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pypsak

金虫 (正式写手)

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试试1.5的胶  模板浓度提高  增加循环数
8楼2013-08-22 13:36:50
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zq347597638

新虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-22 16:55:04
楼主应该搞个marker对照
如果marker也是这样的话,可能跟染色时间有关系,如果marker亮,产物不亮,就增加循环次数试试!
9楼2013-08-22 13:45:06
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-22 19:50:52
引用回帖:
7楼: Originally posted by 毛毛讨厌猫 at 2013-08-22 13:07:26
没有可用的条带??那我的条带是什么??我一般都是跑20min,基本在1/3-1/2处,用的是1%琼胶,那我是不是需要延长下时间呢...

因为你没有DNAmarker   我大概判断你误认是条带的可能是溴酚蓝的颜色带,建议把阳性对照做好  一般我们跑1%琼胶都是110-120V35min  1%胶20分钟有点短  要是分离1.5K的条带估计看不见了
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
10楼2013-08-22 18:22:39
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