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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pcr电泳 加样孔很亮，条带不亮
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zqf523

新虫 (小有名气)

[求助] pcr电泳 加样孔很亮，条带不亮

一共是19个样，为什么没有加样的孔也很亮呢？样是从第2个孔开始加的
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1楼 2012-05-28 16:16:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意二楼，应该是模板里面存在较多的蛋白残留。不知道楼主酶加多少，软过太多也可能会出现这种情况。
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6楼2012-05-29 08:27:38
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普通回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zqf523: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，染胶的溶液确实挺久了 2012-05-29 21:03:41
说明你的染胶溶液比较脏了...换下溶液会好些...
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2楼2012-05-28 18:20:47
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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-28 20:29:27
1.加样孔亮说明，样品有蛋白质等杂质污染。
2.不知道你的模版是什么？基因组，cDNA还是其他的。可能和引物的特异性，退火温度，以及你的循环数有关。
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3楼2012-05-28 18:44:24
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王庭

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-28 20:29:32
这上面没有上样的孔也是亮的，应该不是样品的问题。估计是配胶的试剂出了问题，缓冲液的问题吧或者是琼脂糖、EB等的问题，逐个排查下喽~
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努力做最好的自己！！
4楼2012-05-28 19:02:17
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早冰124

新虫 (初入文坛)
冲洗胶的时候点样孔没冲干净，电泳槽溶液和EB染液都需要勤换的
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5楼2012-05-28 22:02:47
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zqf523: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢，我估计也是缓冲液的问题 2012-05-29 21:02:20
这个我们以前也出现过
一般最可能的原因是你的缓冲液脏了，换一个新的就好了
还有制胶时，把梳子之类的都洗干净，应该问题就不大了
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7楼2012-05-29 08:47:01
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
加样孔亮就让它亮吧，没必要关注。至于你的条带亮不亮，我不知道你用的什么染料染的DNA，染了多久，一般EB染20min效果就会很好
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8楼2012-05-30 10:30:44
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
很明显是照胶或是缓冲液的问题，至于那些说蛋白的...真汗颜啊...那些没点样的孔不也是量的么？胶的边缘也是白的啊，建议楼主将成像系统条条，再做一块干净的胶试试....
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9楼2012-05-30 16:53:40
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Leefengming

银虫 (小有名气)
模板里面存在较多的蛋白残留
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爱生活，也爱科研，我和你一样
10楼2012-05-31 16:32:43
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