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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】pcr条带不亮
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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】pcr条带不亮

我最近一直在做pcr，开始的时候我选用的是10ul体系，后来做30ul体系的时候条带就不亮，而且有些还扩增不出来，后来加大模板量，也没有用，循环数是35个，而且也做了温度梯度，没有梯度的变化，我不知道是哪里出错了。
我扩的是细菌的amoA基因，请问一下怎么检测模板有没有问题？
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1楼 2011-03-31 15:07:57
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-31 20:29:43
鬼娃娃不要天(金币+1): 2011-04-04 12:22:48
你是用什么作为模板的？裂解的菌液还是细菌基因组？
一般100Ul体系也都没有什么问题的，关键是把退火温度选择好，还有延伸时间！
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2楼2011-03-31 15:55:06
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
检测模板可以用内参
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3楼2011-04-01 11:32:02
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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-31 15:55:06:
你是用什么作为模板的？裂解的菌液还是细菌基因组？
一般100Ul体系也都没有什么问题的，关键是把退火温度选择好，还有延伸时间！

我用的是微生物全基因组，因为我的目的条带是amoA基因，后来我做了个温度梯度的，一条带都没见到，不知道是哪出错了？
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4楼2011-04-04 12:21:21
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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-04-01 11:32:02:
检测模板可以用内参

内参是什么呀?我不懂，因为我是刚刚开始接触分子实验的。
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5楼2011-04-04 12:22:23
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zhangby2002

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by 鬼娃娃不要天 at 2011-04-04 12:22:23:
内参是什么呀?我不懂，因为我是刚刚开始接触分子实验的。

我做的是鱼类，一般内参用的是b-actin和18S
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6楼2011-04-04 13:04:12
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2010203011

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 鬼娃娃不要天 at 2011-04-04 12:22:23:
内参是什么呀?我不懂，因为我是刚刚开始接触分子实验的。

细菌好像一般都扩16rS DNA
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7楼2011-04-12 16:35:18
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