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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】pcr条带不亮

我最近一直在做pcr,开始的时候我选用的是10ul体系,后来做30ul体系的时候条带就不亮,而且有些还扩增不出来,后来加大模板量,也没有用,循环数是35个,而且也做了温度梯度,没有梯度的变化,我不知道是哪里出错了。
我扩的是细菌的amoA基因,请问一下怎么检测模板有没有问题?
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★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-31 20:29:43
鬼娃娃不要天(金币+1): 2011-04-04 12:22:48
你是用什么作为模板的?裂解的菌液还是细菌基因组?
一般100Ul体系也都没有什么问题的,关键是把退火温度选择好,还有延伸时间!
2楼2011-03-31 15:55:06
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yucheng9255

木虫 (著名写手)


检测模板可以用内参
3楼2011-04-01 11:32:02
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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-31 15:55:06:
你是用什么作为模板的?裂解的菌液还是细菌基因组?
一般100Ul体系也都没有什么问题的,关键是把退火温度选择好,还有延伸时间!

我用的是微生物全基因组,因为我的目的条带是amoA基因,后来我做了个温度梯度的,一条带都没见到,不知道是哪出错了?
4楼2011-04-04 12:21:21
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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-04-01 11:32:02:
检测模板可以用内参

内参是什么呀?我不懂,因为我是刚刚开始接触分子实验的。
5楼2011-04-04 12:22:23
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zhangby2002

银虫 (小有名气)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 鬼娃娃不要天 at 2011-04-04 12:22:23:
内参是什么呀?我不懂,因为我是刚刚开始接触分子实验的。

我做的是鱼类,一般内参用的是b-actin和18S
6楼2011-04-04 13:04:12
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2010203011

银虫 (小有名气)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 鬼娃娃不要天 at 2011-04-04 12:22:23:
内参是什么呀?我不懂,因为我是刚刚开始接触分子实验的。

细菌好像一般都扩16rS DNA
7楼2011-04-12 16:35:18
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