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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR条带不够亮的原因
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR参数是怎样的呢？原因很多
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11楼2013-08-22 20:36:44
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jxmingcyl

铁虫 (初入文坛)
你扩的是V3区吗？
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12楼2013-08-23 14:31:28
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554526385

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-23 18:01:06
你跑胶不点Marker，不能确定你的条带是不目的条带，PCR是否有结果不能保证。你也没有提供上杨亮，也没有办法根据你的marker亮度确定。
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我存在
13楼2013-08-23 14:51:31
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shiq250

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 毛毛讨厌猫 at 2013-08-22 13:05:18
那怎样才能提高pcr浓度呢？改变退火温度？...

提高模板浓度 增加循环次数
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14楼2013-08-23 15:48:08
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 要点ladder, 这样你才能知道你要的片段在什么地方，并且你的PCR相对浓度。有可能就是EB加少了。
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15楼2013-08-24 11:18:39
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天外飞仙-01

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有扩出来，可以尝试降低退火温度。而且为什么没有marker呢，很难判断胶是否有问题。
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16楼2013-08-24 13:28:54
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石头雪儿

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你们那边怎么EB染色的啊，我们这边是在制备胶的时候就加入EB染料的，大概100ml加6ul的EB吧
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17楼2013-08-24 20:53:54
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-08-22 20:36:44
PCR参数是怎样的呢？原因很多

用的是357f和518r
94℃    5min
94℃    40s
53℃     40s
72℃     1min
72℃      7min
30cycles。
后来改变条件也试过35循环，55℃，效果都不好，亮度差别不大。是什么原因？
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18楼2013-08-26 10:05:10
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)
内容已删除
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19楼2013-08-26 10:07:34
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 天外飞仙-01 at 2013-08-24 13:28:54
没有扩出来，可以尝试降低退火温度。而且为什么没有marker呢，很难判断胶是否有问题。

没有扩出来？？？
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20楼2013-08-26 10:10:14
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