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木子勇夏

新虫 (小有名气)

[求助] 大家请帮帮忙，求图解，DGGE

二次PCR后所得产物经过DGGE检测，所的图像不知道是什么情况？中间有部分没染上色呢？还有就是背景色怎么那么深啊？几次重复跑胶都是这样的情况。

000.jpg
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1楼2013-02-28 11:54:51
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
木子勇夏: 金币+2, ★有帮助 2013-05-17 15:17:52
中间没染上色跟PCR应该没有关系，有可能上染色出现问题，可以同时点一次PCR和二次PCR产物比较~
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2楼2013-02-28 14:46:39
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智慧503

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-01 10:39:41
按照以前做DGGE的经验来看，1是染色剂没有涂均匀，2是PCR产物浓度较低，导致条带不够亮，间接背景很深，3是DGGE的条带没有拉开，做胶的时候把梯度再拉开一些。
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3楼2013-02-28 15:40:57
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhf903 at 2013-02-28 14:46:39
中间没染上色跟PCR应该没有关系，有可能上染色出现问题，可以同时点一次PCR和二次PCR产物比较~

谢谢您，一次与二次比较？请问这个比较出来是想了解什么呢？请指教。
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4楼2013-02-28 16:48:10
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 智慧503 at 2013-02-28 15:40:57
按照以前做DGGE的经验来看，1是染色剂没有涂均匀，2是PCR产物浓度较低，导致条带不够亮，间接背景很深，3是DGGE的条带没有拉开，做胶的时候把梯度再拉开一些。

OK，谢谢指导，我试着把梯度做大点试试。
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5楼2013-02-28 16:48:51
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 木子勇夏 at 2013-02-28 16:48:10
谢谢您，一次与二次比较？请问这个比较出来是想了解什么呢？请指教。...

你不是怀疑是二次PCR导致中间部分没染上色嘛
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6楼2013-02-28 20:10:39
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lhf903 at 2013-02-28 20:10:39
你不是怀疑是二次PCR导致中间部分没染上色嘛...

呵呵，谢谢你那么热情啊。
我疑惑不知道为什么没染上色，我不知道是什么原因，我想告诉大家的信息是我的是第二次PCR的产物。
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7楼2013-03-01 09:01:02
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 木子勇夏 at 2013-03-01 09:01:02
呵呵，谢谢你那么热情啊。
我疑惑不知道为什么没染上色，我不知道是什么原因，我想告诉大家的信息是我的是第二次PCR的产物。...

我做DGGE用的是银染法，跟你的染色方法似乎不同
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8楼2013-03-01 12:42:03
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
嗯啊 我是用Sybr green 染色的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-03-02 10:09:03
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