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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带不够亮的原因

pcr产物跑琼脂糖，条带不够亮，已经重复了很多次还是不够亮，为什么呢？
下一步想要做dgge，可以继续么？
PCR条带不够亮的原因
0821pcr.JPG
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1楼 2013-08-22 09:27:23
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pypsak

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-22 16:54:39
木有marker对照，不知道哪里出问题了
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2楼2013-08-22 09:28:43
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shiq250

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-28 13:52:16
请提供marker 有可能是PCR产物浓度很低
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3楼2013-08-22 09:33:15
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-22 16:54:55
没有DNAmarker,不过从图片上看楼主的电泳中并没有可用条带啊    而且跑电泳时间好像也短了，需要跑整个胶的2/3方可  楼主跑的是1%琼胶吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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兴趣是第一导师，我爱它，因此我毫无疲倦的探索
4楼2013-08-22 09:56:37
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pypsak at 2013-08-22 09:28:43
木有marker对照，不知道哪里出问题了

之前跑过带marker的，marker也是不亮，但是看到别人做过也有marker不亮但是pcr产物条带很亮的，为什么我的做来做去都还是不亮呢？
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5楼2013-08-22 13:04:09
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shiq250 at 2013-08-22 09:33:15
请提供marker 有可能是PCR产物浓度很低

那怎样才能提高pcr浓度呢？改变退火温度？
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6楼2013-08-22 13:05:18
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hkqgeoffrey at 2013-08-22 09:56:37
没有DNAmarker,不过从图片上看楼主的电泳中并没有可用条带啊    而且跑电泳时间好像也短了，需要跑整个胶的2/3方可  楼主跑的是1%琼胶吗？

没有可用的条带？？那我的条带是什么？？我一般都是跑20min，基本在1/3-1/2处，用的是1%琼胶，那我是不是需要延长下时间呢
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7楼2013-08-22 13:07:26
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pypsak

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

试试1.5的胶  模板浓度提高  增加循环数
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8楼2013-08-22 13:36:50
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zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-22 16:55:04
楼主应该搞个marker对照
如果marker也是这样的话，可能跟染色时间有关系，如果marker亮，产物不亮，就增加循环次数试试！
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9楼2013-08-22 13:45:06
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-22 19:50:52
引用回帖:
7楼: Originally posted by 毛毛讨厌猫 at 2013-08-22 13:07:26
没有可用的条带？？那我的条带是什么？？我一般都是跑20min，基本在1/3-1/2处，用的是1%琼胶，那我是不是需要延长下时间呢...

因为你没有DNAmarker   我大概判断你误认是条带的可能是溴酚蓝的颜色带，建议把阳性对照做好  一般我们跑1%琼胶都是110-120V35min  1%胶20分钟有点短  要是分离1.5K的条带估计看不见了
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兴趣是第一导师，我爱它，因此我毫无疲倦的探索
10楼2013-08-22 18:22:39
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