应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DGGE电泳高手请进，看看这个30%-60%的胶梯度合理不？有图求真相！！！
151/2返回列表12下一页
查看: 2014  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

binjicn

银虫 (正式写手)

[求助] DGGE电泳高手请进，看看这个30%-60%的胶梯度合理不？有图求真相！！！

做DGGE已经有三个月了，还是没有出成果，万分着急 ，用的是30%-60%的胶梯度，所区分的DNA大约300bp长度，电压设为110v跑了10个小时，就出现了下面结果：



下半部分放大的效果

所有条带集中在胶的下部分，而且条带很密集，请问该怎么优化，是用25-65%的胶，还是35-65%的梯度，还是缩短跑电泳的时间还是减少电压怎么的？？？
由于手机拍摄 不是很清楚  谢谢

[ Last edited by binjicn on 2012-12-14 at 13:08 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-14 13:04:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为胶的浓度没有问题，但是你这印染的效果很不好，建议所有的溶液还有电泳缓冲液都采用新配的。另外，可以尝试下75v，16h或是160v，6-7个小时试试。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-14 14:12:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)
同命相连啊。。。我的也是，跑DGGE真上火。我的条带也都集中在胶的下半部分，是要调整浓度了。不想做这个啊。。。
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-16 13:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whoisthis

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
binjicn: 金币+2, ★有帮助 2012-12-17 18:21:07
1. 引物加夹子

2. 跑个垂直变性胶确定变性剂范围

或者直接调整胶变性剂范围, 集中在胶的下部分的话, 用35-65%, 因为变性剂梯度底部最浓
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-16 20:01:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqp9110

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
binjicn: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-17 18:20:48
GC夹子没问题的话就加大高变性剂浓度。如果是在摸索新条件的话直接用30-70%先试试好了。另外，时间不必这么长吧，我们跑200bp左右的是200V 4h.
赞一下 回复此楼
BEYOND
5楼2012-12-17 00:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

binjicn

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zqp9110 at 2012-12-17 00:13:14
GC夹子没问题的话就加大高变性剂浓度。如果是在摸索新条件的话直接用30-70%先试试好了。另外，时间不必这么长吧，我们跑200bp左右的是200V 4h.

en
6楼2012-12-17 18:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彼岸花开V

至尊木虫 (正式写手)
貌似用SYBR Green I 染的色啊
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-19 11:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zqp9110 at 2012-12-17 00:13:14
GC夹子没问题的话就加大高变性剂浓度。如果是在摸索新条件的话直接用30-70%先试试好了。另外，时间不必这么长吧，我们跑200bp左右的是200V 4h.

求救啊，我做了很久的DGGE了，就是不出结果，8%，50-70%的胶条带全集中在下半部分，上半部分一条都没有，其他的比如40-60%，45-60%，50-65%就跟糟糕，就有几条带，上部还是没有，快崩溃了，有个同学几天就做出来了，求高手赐教啊
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-21 18:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by whoisthis at 2012-12-16 20:01:23
1. 引物加夹子

2. 跑个垂直变性胶确定变性剂范围

或者直接调整胶变性剂范围, 集中在胶的下部分的话, 用35-65%, 因为变性剂梯度底部最浓

求救啊，我做了很久的DGGE了，就是不出结果，8%，50-70%的胶条带全集中在下半部分，上半部分一条都没有，其他的比如40-60%，45-60%，50-65%就跟糟糕，就有几条带，上部还是没有，快崩溃了，有个同学几天就做出来了，求高手赐教啊
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-21 18:56:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqp9110

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhang226296 at 2014-03-21 18:56:16
求救啊，我做了很久的DGGE了，就是不出结果，8%，50-70%的胶条带全集中在下半部分，上半部分一条都没有，其他的比如40-60%，45-60%，50-65%就跟糟糕，就有几条带，上部还是没有，快崩溃了，有个同学几天就做出来了 ...

这种情况应该是变性条件太低，如果变性剂没有问题的话有可能是体系温度太低，我们用的是60℃。
赞一下 回复此楼
BEYOND
10楼2014-03-21 21:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 binjicn 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +5 陌の森林 2026-03-18 5/250 2026-03-18 22:18 by bingxueer79
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 321求调剂 +3 何润采123 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:27 by li123456789.
[考研] 0703化学 305求调剂 +3 FY_yy 2026-03-14 3/150 2026-03-18 19:40 by macy2011
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考研] 材料与化工求调剂 +6 为学666 2026-03-16 6/300 2026-03-17 20:15 by peike
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭