应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DGGE电泳高手请进，看看这个30%-60%的胶梯度合理不？有图求真相！！！
151/2返回列表12下一页
查看: 2083  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

binjicn

银虫 (正式写手)

[求助] DGGE电泳高手请进，看看这个30%-60%的胶梯度合理不？有图求真相！！！

做DGGE已经有三个月了，还是没有出成果，万分着急 ，用的是30%-60%的胶梯度，所区分的DNA大约300bp长度，电压设为110v跑了10个小时，就出现了下面结果：



下半部分放大的效果

所有条带集中在胶的下部分，而且条带很密集，请问该怎么优化，是用25-65%的胶，还是35-65%的梯度，还是缩短跑电泳的时间还是减少电压怎么的？？？
由于手机拍摄 不是很清楚  谢谢

[ Last edited by binjicn on 2012-12-14 at 13:08 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-14 13:04:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为胶的浓度没有问题，但是你这印染的效果很不好，建议所有的溶液还有电泳缓冲液都采用新配的。另外，可以尝试下75v，16h或是160v，6-7个小时试试。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-14 14:12:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)
同命相连啊。。。我的也是，跑DGGE真上火。我的条带也都集中在胶的下半部分，是要调整浓度了。不想做这个啊。。。
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-16 13:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whoisthis

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
binjicn: 金币+2, ★有帮助 2012-12-17 18:21:07
1. 引物加夹子

2. 跑个垂直变性胶确定变性剂范围

或者直接调整胶变性剂范围, 集中在胶的下部分的话, 用35-65%, 因为变性剂梯度底部最浓
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-16 20:01:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqp9110

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
binjicn: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-17 18:20:48
GC夹子没问题的话就加大高变性剂浓度。如果是在摸索新条件的话直接用30-70%先试试好了。另外，时间不必这么长吧，我们跑200bp左右的是200V 4h.
赞一下 回复此楼
BEYOND
5楼2012-12-17 00:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

binjicn

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zqp9110 at 2012-12-17 00:13:14
GC夹子没问题的话就加大高变性剂浓度。如果是在摸索新条件的话直接用30-70%先试试好了。另外，时间不必这么长吧，我们跑200bp左右的是200V 4h.

en
6楼2012-12-17 18:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彼岸花开V

至尊木虫 (正式写手)
貌似用SYBR Green I 染的色啊
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-19 11:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zqp9110 at 2012-12-17 00:13:14
GC夹子没问题的话就加大高变性剂浓度。如果是在摸索新条件的话直接用30-70%先试试好了。另外，时间不必这么长吧，我们跑200bp左右的是200V 4h.

求救啊，我做了很久的DGGE了，就是不出结果，8%，50-70%的胶条带全集中在下半部分，上半部分一条都没有，其他的比如40-60%，45-60%，50-65%就跟糟糕，就有几条带，上部还是没有，快崩溃了，有个同学几天就做出来了，求高手赐教啊
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-21 18:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by whoisthis at 2012-12-16 20:01:23
1. 引物加夹子

2. 跑个垂直变性胶确定变性剂范围

或者直接调整胶变性剂范围, 集中在胶的下部分的话, 用35-65%, 因为变性剂梯度底部最浓

求救啊，我做了很久的DGGE了，就是不出结果，8%，50-70%的胶条带全集中在下半部分，上半部分一条都没有，其他的比如40-60%，45-60%，50-65%就跟糟糕，就有几条带，上部还是没有，快崩溃了，有个同学几天就做出来了，求高手赐教啊
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-21 18:56:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqp9110

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhang226296 at 2014-03-21 18:56:16
求救啊，我做了很久的DGGE了，就是不出结果，8%，50-70%的胶条带全集中在下半部分，上半部分一条都没有，其他的比如40-60%，45-60%，50-65%就跟糟糕，就有几条带，上部还是没有，快崩溃了，有个同学几天就做出来了 ...

这种情况应该是变性条件太低，如果变性剂没有问题的话有可能是体系温度太低，我们用的是60℃。
赞一下 回复此楼
BEYOND
10楼2014-03-21 21:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 binjicn 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +25 严西西戏 2026-04-06 32/1600 2026-04-11 21:20 by zhouxiaoyu
[找工作] 山东高校教师考核超级无底线，员工过不下去啦 +3 qut2026 2026-04-09 6/300 2026-04-11 19:16 by qut2026
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 280求调剂 +6 兮兮夜夜 2026-04-09 9/450 2026-04-11 12:16 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +8 950824he@ 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:11 by zhq0425
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 282，求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸，感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 266求调剂 +29 阳阳哇塞 2026-04-07 29/1450 2026-04-10 16:20 by 高维春
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 332，085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 318求调剂 +13 ykyhsa 2026-04-05 15/750 2026-04-08 21:37 by wj165256
[考研] 一志愿吉大化学327求调剂 +12 王王白石 2026-04-06 13/650 2026-04-08 16:05 by luoyongfeng
[考研] 304求调剂 +16 c297914 2026-04-05 17/850 2026-04-08 13:00 by grayjzr
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 软工学硕299求调剂 +6 useryy 2026-04-07 6/300 2026-04-07 09:50 by vgtyfty
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭