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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] bio-rad DGGE漏胶问题

DGGE实验真是虐心啊，刚解决一个问题就出现了另一个问题
我实验室用的是伯乐7L的DGGE仪器，仪器是新买的。之前制胶都很正常，不怎么会漏胶，漏的话也是梳子的须须漏掉一些，最近制胶发现漏胶很严重，基本上已经没有梳孔了，但是每次拔梳子之前，看过去都很正常，拔完之后才知道原来须须的地方都是液体，梳子一拔就全部流下去了，于是梳孔也不见了。
我也尝试在制胶前先在玻璃的三边用0%的变性剂封住，但是没有用，第二天还是没有梳孔，不知道是什么原因？
我自己猜想可能是变性剂灌胶后体积变小了，但是如果是这个原因应该怎么解决？因为我之前配的变性剂和现在都是一样的，之前没发生过这种现象
请各位帮我一起分析分析
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1楼 2013-10-16 21:03:14
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wuyao0513

新虫 (小有名气)
洗干净，还有看看制胶的缓冲液有没有变化。。
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2楼2013-10-16 23:10:56
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-10-16 23:10:56
洗干净，还有看看制胶的缓冲液有没有变化。。

洗干净是指玻璃吧，我都是洗干净制胶前再用酒精擦干净。您说的制胶缓冲液指的是变性剂吗？没有发现有什么变化

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-10-16 23:29:40
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-17 09:12:36
doubleping: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2013-10-20 09:31:57
你是不是制剂的时候把硫酸铵溶液和TEMD的剂量放反了啊？？？我之前也出现过这个情况，别的地方都宁的好好的，就是梳子那不凝，结果是两个试剂的量方法了，这个问题应该和清洁度没有关系吧，我做实验是的时候没有用酒精擦过，但是胶凝的好好的。然后你看看你的硫酸铵溶液是不是现用现制的，这个得零下20度保藏，且有效期是7天。
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
4楼2013-10-17 09:09:49
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 瓜尔佳氏鱼鱼 at 2013-10-17 09:09:49
你是不是制剂的时候把硫酸铵溶液和TEMD的剂量放反了啊？？？我之前也出现过这个情况，别的地方都宁的好好的，就是梳子那不凝，结果是两个试剂的量方法了，这个问题应该和清洁度没有关系吧，我做实验是的时候没有用酒 ...

硫酸铵实现配现用的，20ml变性剂80ulAPS，10ultemde，这个剂量没错吧，但是就是出现了这个情况
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5楼2013-10-17 18:29:14
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-18 02:28:23
我做的时候是20ml变性溶液对应180ul，你用的太少了，所以会出现这种情况，考虑加大过硫酸铵溶液的量。对了是过硫酸铵哦，我长时间不做忘记了，10% 的过硫酸铵！！！我做的时候是180ul，百分之十的过硫酸铵，18ulTMED对应20ml的变性溶液，你试试看。
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
6楼2013-10-17 21:22:43
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 瓜尔佳氏鱼鱼 at 2013-10-17 21:22:43
我做的时候是20ml变性溶液对应180ul，你用的太少了，所以会出现这种情况，考虑加大过硫酸铵溶液的量。对了是过硫酸铵哦，我长时间不做忘记了，10% 的过硫酸铵！！！我做的时候是180ul，百分之十的过硫酸铵，18ulTME ...

谢谢你，我改成120的APS和12的TEMED，效果已经改善了很多
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7楼2013-10-20 09:31:41
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by doubleping at 2013-10-20 09:31:41
谢谢你，我改成120的APS和12的TEMED，效果已经改善了很多...

那就好，祝实验成功！
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8楼2013-10-22 18:08:54
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beikeyang

新虫 (初入文坛)
请问一下，为什么用0%的胶封底呢？有什么作用吗？
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9楼2015-04-01 09:53:08
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