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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] bio-rad DGGE漏胶问题

DGGE实验真是虐心啊,刚解决一个问题就出现了另一个问题
我实验室用的是伯乐7L的DGGE仪器,仪器是新买的。之前制胶都很正常,不怎么会漏胶,漏的话也是梳子的须须漏掉一些,最近制胶发现漏胶很严重,基本上已经没有梳孔了,但是每次拔梳子之前,看过去都很正常,拔完之后才知道原来须须的地方都是液体,梳子一拔就全部流下去了,于是梳孔也不见了。
我也尝试在制胶前先在玻璃的三边用0%的变性剂封住,但是没有用,第二天还是没有梳孔,不知道是什么原因?
我自己猜想可能是变性剂灌胶后体积变小了,但是如果是这个原因应该怎么解决?因为我之前配的变性剂和现在都是一样的,之前没发生过这种现象
请各位帮我一起分析分析
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 瓜尔佳氏鱼鱼 at 2013-10-17 21:22:43
我做的时候是20ml变性溶液对应180ul,你用的太少了,所以会出现这种情况,考虑加大过硫酸铵溶液的量。对了是过硫酸铵哦,我长时间不做忘记了,10% 的过硫酸铵!!!我做的时候是180ul,百分之十的过硫酸铵,18ulTME ...

谢谢你,我改成120的APS和12的TEMED,效果已经改善了很多
7楼2013-10-20 09:31:41
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wuyao0513

新虫 (小有名气)

洗干净,还有看看制胶的缓冲液有没有变化。。
2楼2013-10-16 23:10:56
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-10-16 23:10:56
洗干净,还有看看制胶的缓冲液有没有变化。。

洗干净是指玻璃吧,我都是洗干净制胶前再用酒精擦干净。您说的制胶缓冲液指的是变性剂吗?没有发现有什么变化

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-10-16 23:29:40
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-17 09:12:36
doubleping: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2013-10-20 09:31:57
你是不是制剂的时候把硫酸铵溶液和TEMD的剂量放反了啊???我之前也出现过这个情况,别的地方都宁的好好的,就是梳子那不凝,结果是两个试剂的量方法了,这个问题应该和清洁度没有关系吧,我做实验是的时候没有用酒精擦过,但是胶凝的好好的。然后你看看你的硫酸铵溶液是不是现用现制的,这个得零下20度保藏,且有效期是7天。
过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
4楼2013-10-17 09:09:49
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