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binjicn

银虫 (正式写手)

[求助] DGGE电泳高手请进,看看这个30%-60%的胶梯度合理不?有图求真相!!!

做DGGE已经有三个月了,还是没有出成果,万分着急 ,用的是30%-60%的胶梯度,所区分的DNA大约300bp长度,电压设为110v跑了10个小时,就出现了下面结果:



下半部分放大的效果

所有条带集中在胶的下部分,而且条带很密集,请问该怎么优化,是用25-65%的胶,还是35-65%的梯度,还是缩短跑电泳的时间还是减少电压怎么的???
由于手机拍摄 不是很清楚  谢谢

[ Last edited by binjicn on 2012-12-14 at 13:08 ]
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whoisthis

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
binjicn: 金币+2, 有帮助 2012-12-17 18:21:07
1. 引物加夹子

2. 跑个垂直变性胶确定变性剂范围

或者直接调整胶变性剂范围, 集中在胶的下部分的话, 用35-65%, 因为变性剂梯度底部最浓
4楼2012-12-16 20:01:23
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wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人认为胶的浓度没有问题,但是你这印染的效果很不好,建议所有的溶液还有电泳缓冲液都采用新配的。另外,可以尝试下75v,16h或是160v,6-7个小时试试。
2楼2012-12-14 14:12:11
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crystallynn

新虫 (初入文坛)

同命相连啊。。。我的也是,跑DGGE真上火。我的条带也都集中在胶的下半部分,是要调整浓度了。不想做这个啊。。。
3楼2012-12-16 13:10:50
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zqp9110

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
binjicn: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-17 18:20:48
GC夹子没问题的话就加大高变性剂浓度。如果是在摸索新条件的话直接用30-70%先试试好了。另外,时间不必这么长吧,我们跑200bp左右的是200V 4h.
BEYOND
5楼2012-12-17 00:13:14
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