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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DGGE电泳高手请进，看看这个30%-60%的胶梯度合理不？有图求真相！！！
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binjicn

银虫 (正式写手)

[求助] DGGE电泳高手请进，看看这个30%-60%的胶梯度合理不？有图求真相！！！

做DGGE已经有三个月了，还是没有出成果，万分着急 ，用的是30%-60%的胶梯度，所区分的DNA大约300bp长度，电压设为110v跑了10个小时，就出现了下面结果：



下半部分放大的效果

所有条带集中在胶的下部分，而且条带很密集，请问该怎么优化，是用25-65%的胶，还是35-65%的梯度，还是缩短跑电泳的时间还是减少电压怎么的？？？
由于手机拍摄 不是很清楚  谢谢

[ Last edited by binjicn on 2012-12-14 at 13:08 ]
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1楼 2012-12-14 13:04:56
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zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by whoisthis at 2012-12-16 20:01:23
1. 引物加夹子

2. 跑个垂直变性胶确定变性剂范围

或者直接调整胶变性剂范围, 集中在胶的下部分的话, 用35-65%, 因为变性剂梯度底部最浓

求救啊，我做了很久的DGGE了，就是不出结果，8%，50-70%的胶条带全集中在下半部分，上半部分一条都没有，其他的比如40-60%，45-60%，50-65%就跟糟糕，就有几条带，上部还是没有，快崩溃了，有个同学几天就做出来了，求高手赐教啊
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9楼2014-03-21 18:56:29
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wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为胶的浓度没有问题，但是你这印染的效果很不好，建议所有的溶液还有电泳缓冲液都采用新配的。另外，可以尝试下75v，16h或是160v，6-7个小时试试。
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2楼2012-12-14 14:12:11
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crystallynn

新虫 (初入文坛)
同命相连啊。。。我的也是，跑DGGE真上火。我的条带也都集中在胶的下半部分，是要调整浓度了。不想做这个啊。。。
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3楼2012-12-16 13:10:50
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whoisthis

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
binjicn: 金币+2, ★有帮助 2012-12-17 18:21:07
1. 引物加夹子

2. 跑个垂直变性胶确定变性剂范围

或者直接调整胶变性剂范围, 集中在胶的下部分的话, 用35-65%, 因为变性剂梯度底部最浓
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4楼2012-12-16 20:01:23
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