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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助DGGE的问题
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助DGGE的问题

我做了一次DGGE，条带是有的，但是跑的不是开，请问 是什么原因？有什么解决办法？
电压时60V ，时间是12h，梯度是30%-70%

[ Last edited by asdfghjkl-00 on 2011-1-11 at 09:58 ]
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1楼 2011-01-11 09:56:43
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):说的是啊 2011-01-12 10:02:57
先做个垂直电泳，摸索一下最适梯度吧
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2楼2011-01-11 10:38:17
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suoyi001

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5):鼓励新虫交流 2011-01-11 14:08:53
asdfghjkl-00(金币+1): 2011-01-12 09:15:35
梯度不够啊，建议跑个梯度，跑的时间12h，有些长吧，我们都是4h。看看会不会是染色时间不够啊。
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3楼2011-01-11 13:43:25
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在雨中

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
asdfghjkl-00(金币+1): 2011-01-12 09:14:49
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-12 10:03:10
我如果是120V，才跑12h的，难道你的电泳时间不够？很有可能！
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4楼2011-01-11 16:11:08
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hfkset

铜虫 (初入文坛)
不懂，学习一下
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5楼2011-01-11 17:08:37
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孟孟525

铁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):恩，没错 2011-01-12 10:03:24
DGGE需要预先摸索条件的 时间电压 变性剂的浓度都很重要
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6楼2011-01-11 21:16:48
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by suoyi001 at 2011-01-11 13:43:25:
梯度不够啊，建议跑个梯度，跑的时间12h，有些长吧，我们都是4h。看看会不会是染色时间不够啊。

电压不大，所以跑的长，染色用的是EB，时间是20分钟，我也觉得是梯度的问题
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7楼2011-01-12 09:10:41
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 在雨中 at 2011-01-11 16:11:08:
我如果是120V，才跑12h的，难道你的电泳时间不够？很有可能！

有的条带已经跑到下边了，我怕再跑就出去了，所以想调整一下梯度，看是否可行？
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8楼2011-01-12 09:13:13
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在雨中

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):很有经验啊~~~鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 10:29:31
引用回帖:
Originally posted by asdfghjkl-00 at 2011-01-12 09:13:13:

有的条带已经跑到下边了，我怕再跑就出去了，所以想调整一下梯度，看是否可行？

你范了一个严重的概念错误。如果梯度合适，电泳时间再长DNA也不会跑出去的，因为DNA在它最合适的地方解链，迁移率非常低。
你的是不是细菌的DGGE？V3区的，这个梯度比较合适了。
真菌的话，大概20-50%的梯度。

你可以把你的上梯度弄大些，比如40-70%，但电泳时间要足够。我做的话，一般100-120V，12h。效果很好。
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9楼2011-01-12 10:13:08
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 在雨中 at 2011-01-12 10:13:08:


你范了一个严重的概念错误。如果梯度合适，电泳时间再长DNA也不会跑出去的，因为DNA在它最合适的地方解链，迁移率非常低。
你的是不是细菌的DGGE？V3区的，这个梯度比较合适了。
真菌的话，大概20-50%的梯度 ...

恩，好的，谢谢！
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10楼2011-01-12 11:28:25
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