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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DGGE的问题
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gemmy冷心

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】DGGE的问题

我做DGGE的时候，制胶之后点样孔里总是剩下一点液体，看上去也不是没凝好的胶，然后点样的时候样品总是忘旁边的孔里跑，飘得特别厉害，大家有没有见过这种情况？有什么意见啊？求指教啊……
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1楼 2011-02-10 10:00:52
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reasonspare

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): good！ 2011-02-10 19:18:32
引用回帖:
Originally posted by gemmy冷心 at 2011-02-10 10:00:52:
我做DGGE的时候，制胶之后点样孔里总是剩下一点液体，看上去也不是没凝好的胶，然后点样的时候样品总是忘旁边的孔里跑，飘得特别厉害，大家有没有见过这种情况？有什么意见啊？求指教啊……

那是你的丙烯酰胺胶 凝固过程中产生的溶液，通常是高离子强度。
所以通常我们要用热的电泳缓冲液冲洗若干次。然后再上样。

小记：每个点样孔要清洗干净，否则不同的离子强度影响电泳的迁移率。
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2楼2011-02-10 10:14:41
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在雨中

金虫 (著名写手)
★
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
应该算是正常的，会有一点点胶不会凝固。你做好胶后把胶放在加热的电泳槽旁，高温会促进胶的凝固。如果很像块点凝固，就用电吹风吧，不过我不推荐这样。
加样的时候的样品飘到别的空也很常见。。。呵呵。。。注意动作轻就好了。。。
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5楼2011-02-10 12:53:26
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gemmy冷心

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lordring at 2011-02-10 11:04:46:

可是飘得很严重呢 会很快量也挺大的 所以影响到旁边的样品结果呢
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6楼2011-02-12 09:53:11
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gemmy冷心

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gemmy冷心 at 2011-02-10 10:00:52:
我做DGGE的时候，制胶之后点样孔里总是剩下一点液体，看上去也不是没凝好的胶，然后点样的时候样品总是忘旁边的孔里跑，飘得特别厉害，大家有没有见过这种情况？有什么意见啊？求指教啊……

用热的缓冲液冲洗？拔出梳子来之后冲洗点样孔吗？我觉得剩下的那点不是胶 是水啊 我用细的枪头可以吸出来而且不会凝呢
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7楼2011-02-12 09:54:54
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
★
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by gemmy冷心 at 2011-02-10 02:00:52:
我做DGGE的时候，制胶之后点样孔里总是剩下一点液体，看上去也不是没凝好的胶，然后点样的时候样品总是忘旁边的孔里跑，飘得特别厉害，大家有没有见过这种情况？有什么意见啊？求指教啊……

把支架放入缓冲液后，用热缓冲液冲洗点样孔，上样时只要看着点 别上满样不就不会漂了吗，其实上样少一点不会影响结果的
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9楼2011-02-21 11:02:22
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5018

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): good 2011-04-22 16:06:12
我也遇见过这些情况，点样时往邻孔飘，而且挺严重的，现在已经基本没这种情况了，我主要是先往里面注满电泳槽里的buffer，点样的时候尽量慢些。我孩遇见另一种情况是，拔了梳子后会发现胶孔底部有些凹槽，不知道会不会影响结果，请教下各位高手、
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10楼2011-04-22 16:03:51
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良缘百合

金虫 (正式写手)
★
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 5018 at 2011-04-22 16:03:51:
我也遇见过这些情况，点样时往邻孔飘，而且挺严重的，现在已经基本没这种情况了，我主要是先往里面注满电泳槽里的buffer，点样的时候尽量慢些。我孩遇见另一种情况是，拔了梳子后会发现胶孔底部有些凹槽，不知道会 ...

我现在制胶也发现，拔了梳子后胶孔底部有些凹槽，不知道会不会影响跑样。
请问你的问题解决了么？
或者哪个高手帮忙解释下，谢谢啦
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11楼2011-05-25 16:11:43
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clwlmxr43楼
2011-02-10 10:40   回复  
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
顶一下！
lordring4楼
2011-02-10 11:04   回复  
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
huigoo8楼
2011-02-12 11:17   回复  
gemmy冷心(金币+1):谢谢参与
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