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5018

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助DGGE染色问题

各位:小弟最近跑DGGE,不知道是哪里出问题,PCR产物的琼脂糖电泳条带都非常亮,但是跑DGGE的时候染色完后都出现一片明亮的条带,已经不是一次了,而且我同学也有这种情况出现,请各位帮忙分析下。使用的是super greenI染色,1.5微升用1XTAE稀释10000倍表面涂抹染色两次,每次15分钟。DNA模板为去年9月份提取的昆虫肠道总DNA,-20摄氏度保存,有反复冻融现象,如果是DNA问题,但是PCR产物使用琼脂糖检测都是非常好的条带。下面有附图










[ Last edited by 5018 on 2011-4-23 at 17:31 ]
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一杯香茗,一卷书,偷得半日闲散;一抹斜阳,一壶酒,愿求半世逍遥。
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
10楼2011-05-05 16:54:03
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wwling

铜虫 (小有名气)



reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-26 11:17:22
PCR产物纯化了吗?从PCR产物普通电泳来看,好像有非特异带哦
  或者上样量太多了?
2楼2011-04-24 19:02:32
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5018

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wwling at 2011-04-24 19:02:32:
PCR产物纯化了吗?从PCR产物普通电泳来看,好像有非特异带哦
  或者上样量太多了?

PCR不需要纯化的吧 而且非特异性扩增也是DNA 也得有条带啊 我现在的情况是PCR狠亮 但是DGGE没条带啊。
一杯香茗,一卷书,偷得半日闲散;一抹斜阳,一壶酒,愿求半世逍遥。
3楼2011-04-25 23:19:34
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-26 11:17:31
是不是和你的电泳条件设置有关啊?你的梯度是多少啊?电压和时间呢?
4楼2011-04-26 09:44:44
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