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5018

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助DGGE染色问题

各位:小弟最近跑DGGE,不知道是哪里出问题,PCR产物的琼脂糖电泳条带都非常亮,但是跑DGGE的时候染色完后都出现一片明亮的条带,已经不是一次了,而且我同学也有这种情况出现,请各位帮忙分析下。使用的是super greenI染色,1.5微升用1XTAE稀释10000倍表面涂抹染色两次,每次15分钟。DNA模板为去年9月份提取的昆虫肠道总DNA,-20摄氏度保存,有反复冻融现象,如果是DNA问题,但是PCR产物使用琼脂糖检测都是非常好的条带。下面有附图










[ Last edited by 5018 on 2011-4-23 at 17:31 ]
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一杯香茗,一卷书,偷得半日闲散;一抹斜阳,一壶酒,愿求半世逍遥。
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wallace974

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR产物没有优化好,非特异性扩增太多,建议做梯度优化,扩出单一条带再跑DGGE,否则smear难以避免
万物一理,万法自然
7楼2011-04-28 17:17:05
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