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放线菌分子生物学鉴定
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我提取的放线菌总DNA用通用引物扩增目的序列，测序结果如下： 您的PCR样品 (2) （使用27F/1492R 引物 ）测序后发现有重叠现象,我们怀疑是由以下几个方面的原因造成的： 1.已纯化的PCR样品造成这种情况的原因是由于模板纯化有一定问题，模板中含有非特异性的条带； 2.如果是未纯化的PCR产物，那么有可能是您要求测序的片段周围含有大小相近的条带，我们通过琼脂糖凝胶回收，无法有效切除这种大小差别不是很明显的条带； 3.模板或是引物质量较差，测序反应结束之后没有产生足够的目的产物，导致测序信号较弱，杂背景较高，形成重叠现象。 这些原因都可能造成PCR样品测序之后出现重叠现象.建议您改进后重新进行测序。 以上是测序公司的反馈，该怎么解决这些问题呢，谢谢大家。 |
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2楼2011-09-04 10:19:54
3楼2011-09-04 10:52:26
4楼2011-09-04 10:59:47
5楼2011-09-04 11:01:06
foxcl
铁虫 (正式写手)
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6楼2012-05-11 22:10:40
7楼2012-08-18 15:13:44
woshizhufeng
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- 专业: 植物病理学
8楼2012-08-18 22:40:28
楼主可以说说你提放线菌DNA的过程吗？前期液体培养多久？怎样破壁的？如果用TE和溶菌酶处理37℃多久才能破壁？帮帮忙吧，失败好多次，快无语了
9楼2016-06-13 12:49:52
