应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 放线菌分子生物学鉴定
51/1返回列表
查看: 2832  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

qwky2010

金虫 (著名写手)

[求助] 放线菌分子生物学鉴定

我提取的放线菌总DNA用通用引物扩增目的序列，测序结果如下：
您的PCR样品  (2)  （使用27F/1492R  引物  ）测序后发现有重叠现象,我们怀疑是由以下几个方面的原因造成的：
1.已纯化的PCR样品造成这种情况的原因是由于模板纯化有一定问题，模板中含有非特异性的条带；
2.如果是未纯化的PCR产物，那么有可能是您要求测序的片段周围含有大小相近的条带，我们通过琼脂糖凝胶回收，无法有效切除这种大小差别不是很明显的条带；
3.模板或是引物质量较差，测序反应结束之后没有产生足够的目的产物，导致测序信号较弱，杂背景较高，形成重叠现象。
    这些原因都可能造成PCR样品测序之后出现重叠现象.建议您改进后重新进行测序。
以上是测序公司的反馈，该怎么解决这些问题呢，谢谢大家。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
天道酬勤
1楼 2011-09-04 09:45:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwky2010

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-04 10:19:54:
你有没有电泳检测PCR产物是否有杂带？如果有杂带的话你切胶回收，或是送给公司测序的时候说是未纯化的PCR产物。
另外，你可以做TA克隆，用pMD19-T Vector来做，效果很好，不会出现上述你说的重叠现象，但是必须保 ...

测序公司已经帮忙胶回收纯化了，但是无法有效切除这种大小差别不是很明显的条带，请问再怎么改进呢？
赞一下 回复此楼
天道酬勤
3楼2011-09-04 10:52:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

qwky2010(金币+5): 谢谢帮助 2011-09-04 11:01:30
你有没有电泳检测PCR产物是否有杂带？如果有杂带的话你切胶回收，或是送给公司测序的时候说是未纯化的PCR产物。
另外，你可以做TA克隆，用pMD19-T Vector来做，效果很好，不会出现上述你说的重叠现象，但是必须保证你回收的片段是纯的。
赞一下 回复此楼
2楼2011-09-04 10:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-04 17:48:10
这说明你PCR的非特异性扩增条带的大小跟你的目的基因条带的大小差不多，不易分离。你设置PCR反应程序的退火温度是多少？可以把退火温度提高一点，减少非特异性扩增。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-04 10:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-04 17:48:24
qwky2010(金币+15): 谢了啊 2011-09-05 16:59:39
个人建议还是做一下TA克隆比较好。不会出现重叠现象。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-09-04 11:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +14 enenenhui 2026-03-13 15/750 2026-03-19 21:53 by allen-yin
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 326求调剂 +4 诺贝尔化学奖觊� 2026-03-15 7/350 2026-03-16 17:11 by 诺贝尔化学奖觊�
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 5/250 2026-03-16 10:50 by 我可以上岸的对�
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭