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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急求解！Pcr循环数问题...
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咮唦

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求解！Pcr循环数问题... 已有1人参与

Pcr循环数过多会对结果产生什么影响？拖带有可能是循环数过多引起的吗？我的模板是经纯化过的，会不会是模板浓度太高的问题？
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1楼 2012-04-27 19:52:38
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-28 09:21:59
延伸时间太长时，会出现涂布现象
循环次数太多可使产物序列中引入错误
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未来不是梦
2楼2012-04-27 19:57:14
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cxfans

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-28 09:22:09
体外扩增有种说法是平台效应，即扩增循环增加，而模板量不再增加，所以一般PCR扩增循环数在34~40，模板浓度高会使目的条带很亮（也很粗），但应该不会使拖尾，会不会是DNA提取 纯化过程有片段化（断裂）
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3楼2012-04-27 21:31:10
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-04-28 09:22:28
"Pcr循环数过多会对结果产生什么影响？拖带有可能是循环数过多引起的吗？我的模板是经纯化过的，会不会是模板浓度太高的问题？"
Pcr循环数过多会对结果产生非特异性扩增，模板浓度太高、镁离子浓度高、退火时间长、退火温度低、延伸时间长也会产生非特异性扩增，结果都会在电泳产生拖带。
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4楼2012-04-27 23:47:15
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kly312254857

铁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 应助指数-1, 鼓励新虫交流~不过这种就不算应助回帖了哈 2012-05-04 18:34:46
自己摸索几个条件就好了
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5楼2012-04-27 23:48:43
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lxbgjx

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
太多会使pcr出现错误，使非特异性片段产生，28——32最好，温度可以做TOUCHDOWN
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6楼2012-04-28 14:54:36
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轻舞小仙

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-04 18:35:11
我有遇到跟你一样的问题，尤其我挑斑做模板做PCR后，跑胶验证时直接全是黑色甬道，估计跟我挑斑下手太重有关。模板浓度太高会导致PCR产物跟模板结合而非引物，引起非特异性扩增增多，严重时没有条带。
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7楼2012-05-04 14:56:45
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hollyjiang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PCR后电泳拖带出现的原因有很多，如引物特异性不好、模板浓度过高、还有可能是退火温度过高等等。循环数和拖带关系不大。多尝试几次不同PCR条件应该就好了，祝你好运
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一定要签名嘛
8楼2012-05-10 20:05:38
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〇秋基地

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

看前辈们总结的。
出现片状拖带或涂抹带
　　PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，循环次数过多，退火温度过低，引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量，减少循环次数。
望有用。
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喜欢选择的，选择喜欢的！
9楼2014-08-18 15:58:14
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