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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】半定量RT-PCR的循环数30个是不是太多了啊
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20040359

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】半定量RT-PCR的循环数30个是不是太多了啊

如题。。
欢迎交流。。
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1楼 2011-01-22 15:02:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
20040359(金币+2): 2011-01-22 19:53:31
是比较多。要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜
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2楼2011-01-22 15:13:36
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20040359

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 15:13:36:
是比较多。要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜

请问一般以多少循环为宜？
谢谢啊  20 -25吧。。
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3楼2011-01-22 19:53:24
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:36:37
引用回帖:
Originally posted by 20040359 at 2011-01-22 19:53:24:


请问一般以多少循环为宜？
谢谢啊  20 -25吧。。

没有定数，不过你说的范围也可以
最好是以刚好能看见为宜，不过为了保证每次都能扩出来，就再往上加多一两个循环
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4楼2011-01-22 20:14:00
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)
还好，不多啊
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6楼2011-01-22 22:12:59
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 20:14:00:


没有定数，不过你说的范围也可以
最好是以刚好能看见为宜，不过为了保证每次都能扩出来，就再往上加多一两个循环

半定量不是比较各个样品条带的亮度吗？ 以刚好能看见为宜是什么程度
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7楼2011-01-23 10:23:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-23 10:23:03:



半定量不是比较各个样品条带的亮度吗？ 以刚好能看见为宜是什么程度

是啊，但是你好好去看一下PCR动力学方面的材料就知道，只有在指数期比较才是最准确的
然而一般跑胶能看见条带的时候，指数期都快过半了，如果再往后进入线性期甚至平台期，那么就会得出假阴性的结果
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8楼2011-01-23 10:30:48
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zycly86

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-23 10:30:48:


是啊，但是你好好去看一下PCR动力学方面的材料就知道，只有在指数期比较才是最准确的
然而一般跑胶能看见条带的时候，指数期都快过半了，如果再往后进入线性期甚至平台期，那么就会得出假阴性的结果

如果我想比较诱导表达处理不同时间的基因表达量，那摸索循环数是以哪个样品的条带为准呢？ 比如样品有ABA处理0h 1h　２ｈ　３ｈ　４　ｈ　５ｈ　，我摸索循环数该以哪个时间为准呢？毕竟不同样品的目的基因的表达量不同，模板量也不同
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9楼2011-01-23 17:26:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by zycly86 at 2011-01-23 17:26:47:



如果我想比较诱导表达处理不同时间的基因表达量，那摸索循环数是以哪个样品的条带为准呢？ 比如样品有ABA处理0h 1h　２ｈ　３ｈ　４　ｈ　５ｈ　，我摸索循环数该以哪个时间为准呢？毕竟不同样品的目的基因 ...

这种情况啊，用中间那个吧
一般比较两个的话，就以预期高的那个为准
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10楼2011-01-23 17:32:33
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 15:13:36:
是比较多。要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜

不是以刚好看见为宜吧，一般以选择上升期的中间数作为最佳循环数
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11楼2011-01-23 19:52:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-01-23 19:52:30:



不是以刚好看见为宜吧，一般以选择上升期的中间数作为最佳循环数

当跑胶都可以看见的话……指数期都一半左右了吧~
在实时定量中可以看到，阈值一般都在起峰后不久那里
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12楼2011-01-23 21:45:48
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QSHQ5楼
2011-01-22 20:49   回复  
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