[交流] 【求助/交流】半定量RT-PCR的循环数30个是不是太多了啊

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 15:13:36:
是比较多。要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜

Originally posted by 20040359 at 2011-01-22 19:53:24:


请问一般以多少循环为宜？
谢谢啊  20 -25吧。。

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 20:14:00:


没有定数，不过你说的范围也可以
最好是以刚好能看见为宜，不过为了保证每次都能扩出来，就再往上加多一两个循环

Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-23 10:23:03:



半定量不是比较各个样品条带的亮度吗？ 以刚好能看见为宜是什么程度

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-23 10:30:48:


是啊，但是你好好去看一下PCR动力学方面的材料就知道，只有在指数期比较才是最准确的
然而一般跑胶能看见条带的时候，指数期都快过半了，如果再往后进入线性期甚至平台期，那么就会得出假阴性的结果

Originally posted by zycly86 at 2011-01-23 17:26:47:



如果我想比较诱导表达处理不同时间的基因表达量，那摸索循环数是以哪个样品的条带为准呢？ 比如样品有ABA处理0h 1h　２ｈ　３ｈ　４　ｈ　５ｈ　，我摸索循环数该以哪个时间为准呢？毕竟不同样品的目的基因 ...

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 15:13:36:
是比较多。要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜

Originally posted by yucheng9255 at 2011-01-23 19:52:30:



不是以刚好看见为宜吧，一般以选择上升期的中间数作为最佳循环数