[交流] 【求助/交流】半定量RT-PCR的循环数30个是不是太多了啊

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1楼2011-01-22 15:02:56

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

20040359(金币+2): 2011-01-22 19:53:31

是比较多。要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜

2楼2011-01-22 15:13:36

20040359

金虫 (小有名气)

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 15:13:36:
是比较多。要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜

请问一般以多少循环为宜？
谢谢啊 20 -25吧。。

3楼2011-01-22 19:53:24

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:36:37

引用回帖:

Originally posted by 20040359 at 2011-01-22 19:53:24:

请问一般以多少循环为宜？
谢谢啊 20 -25吧。。

没有定数，不过你说的范围也可以
最好是以刚好能看见为宜，不过为了保证每次都能扩出来，就再往上加多一两个循环

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4楼2011-01-22 20:14:00

zhp1984816

铜虫 (初入文坛)

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还好，不多啊

6楼2011-01-22 22:12:59

xnbioinfor

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 20:14:00:

没有定数，不过你说的范围也可以
最好是以刚好能看见为宜，不过为了保证每次都能扩出来，就再往上加多一两个循环

半定量不是比较各个样品条带的亮度吗？以刚好能看见为宜是什么程度

7楼2011-01-23 10:23:03

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:

Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-23 10:23:03:

半定量不是比较各个样品条带的亮度吗？以刚好能看见为宜是什么程度

是啊，但是你好好去看一下PCR动力学方面的材料就知道，只有在指数期比较才是最准确的
然而一般跑胶能看见条带的时候，指数期都快过半了，如果再往后进入线性期甚至平台期，那么就会得出假阴性的结果

8楼2011-01-23 10:30:48

zycly86

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-23 10:30:48:

是啊，但是你好好去看一下PCR动力学方面的材料就知道，只有在指数期比较才是最准确的
然而一般跑胶能看见条带的时候，指数期都快过半了，如果再往后进入线性期甚至平台期，那么就会得出假阴性的结果

如果我想比较诱导表达处理不同时间的基因表达量，那摸索循环数是以哪个样品的条带为准呢？比如样品有ABA处理0h 1h　２ｈ　３ｈ　４　ｈ　５ｈ　，我摸索循环数该以哪个时间为准呢？毕竟不同样品的目的基因的表达量不同，模板量也不同

9楼2011-01-23 17:26:47

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:

Originally posted by zycly86 at 2011-01-23 17:26:47:

如果我想比较诱导表达处理不同时间的基因表达量，那摸索循环数是以哪个样品的条带为准呢？比如样品有ABA处理0h 1h　２ｈ　３ｈ　４　ｈ　５ｈ　，我摸索循环数该以哪个时间为准呢？毕竟不同样品的目的基因 ...

这种情况啊，用中间那个吧
一般比较两个的话，就以预期高的那个为准

10楼2011-01-23 17:32:33