24小时热门版块排行榜

返回列表

微微卫10

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 27.5
散金: 8
红花: 1
帖子: 13
在线: 11.7小时
虫号: 2056114
注册: 2012-10-12
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 梯度PCR的问题已有7人参与

我的实验是扩细菌的一段基因，大概1700bp，我做了2次梯度PCR，虽然引物二聚体很严重，但都能扩出目的条带。当我从梯度PCR中选出最佳温度单独扩增，却只有引物二聚体没有目的条带，我的体系是25ul，引物0.3ul,引物浓度为10ul，酶0.4ul。快过年了，实验还是一塌糊涂，心中十分郁闷，求各位大虾都帮帮忙，出出招，感谢各位了

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求解PCR问题《忘记加水的前后》已经有13人回复
揪心的菌落PCR 已经有16人回复
以1800的线性DNA做模板PCR怎么P不出来已经有9人回复
总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体已经有23人回复
电泳条带很淡，能用于割胶回收吗已经有7人回复
克隆目的基因已经有11人回复
rt-pcr图，请大神们帮助分析一下，急。。。谢谢。。。已经有20人回复
为什么有的样品批不出来东西，DNA检测时挺好的啊已经有26人回复
求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊已经有12人回复
pcr一直不出结果，可以从哪些方面调整已经有13人回复
自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？已经有17人回复
1.5kb的 PCR目的序列GC含量高达67%，引物Tm值达90℃，怎么P比较好？已经有16人回复
为什么不同PCR仪扩增结果不同已经有7人回复
【求助/交流】梯度PCR有产物，恒温无产物已经有5人回复
【求助/交流】（5.20更新）PCR产物电泳没有条带，why? 已经有20人回复

心诚则灵

1楼 2013-01-20 14:46:46

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

MolEPI: 1
应助: 21 (小学生)
金币: 7226.1
散金: 650
帖子: 238
在线: 354.9小时
虫号: 808006
注册: 2009-07-13
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

那你直接用梯度PCR扩增，放在最佳的位置试试？

赞一下

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

XOooZzz

2楼2013-01-20 21:31:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

"引物0.3ul,引物浓度为10ul"
这是咋整的？引物浓度是10μM？
PCR时的引物终浓度一般是0.1-1.0μM。你根据自己的stock算一下。
你PCR后需要用这个片段做克隆还是有什么其他目的。如果只是克隆的话，能P出来就直接往下做就可以了。如果是要优化条件去做定量什么的，引物不好是不行的。

赞一下

回复此楼

3楼2013-01-21 05:31:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖